大鼠再生肝臟細胞周期的研究.pdf

1、目的:通過分離、純化再生肝中各種細胞,研究大鼠肝再生中肝臟細胞增殖周期變化及體內(nèi)外細胞增殖周期異同。
　　 方法:建立大鼠2/3肝切除模型,分別于術(shù)后恢復(fù)0h、12h、24h、27h、30h、33h、36h、39h、42h、48h、60h、72h、96h、120h等時間點采用原位膠原酶消化和密度梯度離心法分離、純化再生肝臟細胞;用免疫組織化學(xué)方法鑒定獲得的再生肝臟細胞;用流式細胞術(shù)測定再生肝臟細胞DNA含量,分析增殖特點。建立再

2、生肝肝細胞體外培養(yǎng)方法,用流式細胞術(shù)檢測不同時間點培養(yǎng)細胞的增殖特點。
　　 結(jié)果:成功分離出再生肝細胞、膽管上皮細胞、庫普弗細胞、肝血竇內(nèi)皮細胞、肝星狀細胞、肝卵圓細胞等,細胞活性均在95％以上。免疫組化顯示,分離的細胞純度均在90％以上,符合實驗要求。肝再生中,肝細胞周期約30h,G1期約為6h,S期約12h,G2/M期約12h。膽管上皮細胞周期約48h,G0/G1期約為18h,S期約24h,G2/M期約9h。庫普弗細胞周期

3、約24h,G0/G1期約為9h,S期約9h,G2/M期約6h。竇內(nèi)皮細胞周期約33h,G0/G1期約為9h,S期約12h,G2/M期約12h。肝星形細胞周期約36h,G0/G1期約為12h,S期約12h,G2/M期約12h。肝卵圓細胞周期約30h,G0/G1期約為12h,S期約12h,C2/M期約6h。
　　 體外培養(yǎng)的再生肝細胞,細胞生長狀態(tài)良好,具有正常肝細胞功能。培養(yǎng)過程中再生肝細胞調(diào)整期稍有變化,細胞增殖主要發(fā)生在培養(yǎng)2