核桃水提物神經(jīng)營養(yǎng)作用研究.pdf

1、社會人口老齡化加重,使老年疾病受到重視,神經(jīng)退行性疾病嚴重影響患者正常生命活動,因此解決此類問題刻不容緩。天然產(chǎn)物類藥物有不可替代的優(yōu)勢,其來源廣泛,結(jié)構(gòu)多樣且安全性高,成為近年來藥物發(fā)展的新重點。核桃(Juglans regia L)是胡桃科核桃屬多年生落葉喬木,學名胡桃。在我國栽培歷史悠久,華北、西北、西南、華中、華南和華東,新疆南部等22個省份均有大面積種植。核桃中含有豐富的油脂,蛋白質(zhì)多種微量元素。其中含有的亞油酸、亞麻酸、油酸

2、等的活性是近年研究較多的方面。大量文獻實驗結(jié)果顯示,不飽和脂肪酸對降低膽固醇,延緩大腦神經(jīng)的衰老和促進神經(jīng)再生意義重大。核桃仁中除了油脂部分具有這樣的活性,水溶性部分是否也有類似神經(jīng)營養(yǎng)、神經(jīng)保護活性是本論文研究的重點。將新鮮核桃去皮后打粉脫脂,脫脂粉加水超聲提取后的水溶液旋蒸干重新用水溶解成2g/mL溶液作為母液,用神經(jīng)母細胞瘤細胞(SH-SY5Y)細胞系構(gòu)建體外神經(jīng)實驗模型,以神經(jīng)突觸生長為評價指標,評價核桃水提物的神經(jīng)營養(yǎng)作用。進

3、而檢測神經(jīng)絲蛋白(NF160)的基因表達量和蛋白表達量是否上調(diào)。得到的主要結(jié)論如下:
　　(1)核桃水提物穩(wěn)定性實驗顯示,水提物在溫度較高時會出現(xiàn)降解現(xiàn)象。水提物過0.22μm水系膜后分別放置于4℃、25℃和37℃溫度下分別處理1d,2d,3d后用高效液相檢測,之后用中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件對色譜峰經(jīng)行分析,結(jié)果顯示37℃放置1d后水提物中有物質(zhì)出現(xiàn)明顯降解現(xiàn)象,25℃中也有此類現(xiàn)象出現(xiàn),但在4℃下放置3d并未出現(xiàn)明顯降解情

4、況。調(diào)節(jié)水提物pH為5.5、6.5、7.5、8.5分別處理1h后用液相檢測,中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件結(jié)果顯示并未有明顯差異,故認為沒有明顯降解出現(xiàn)。所以水提物建議存放于4℃以下溫度,以保證樣品不降解。
　　(2)核桃未去皮脫脂粉水提物有明顯細胞毒性,去皮核桃脫脂粉水提物沒有明顯細胞毒性。核桃未去皮脫脂水提物處理細胞24h后進行MTT實驗,結(jié)果顯示水提物終濃度在400μg/mL以上出現(xiàn)明顯細胞毒性。而去皮后的核桃粉水提物MTT

5、實驗結(jié)果顯示,水提物終濃度從0.128mg/mL到2000mg/mL之間沒有明顯細胞毒性。
　　(3)核桃去皮脫脂水提物有促進SH-SY5Y細胞突觸伸長的活性,且能夠上調(diào)NF160基因的表達和蛋白的表達量。去皮水提物處理細胞1w后用熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)終濃度為5mg/mL時細胞突觸相對空白對照組有明顯增長現(xiàn)象。水提物處理細胞24h后提取細胞RNA和蛋白進行熒光定量PCR和Westren blot實驗結(jié)果顯示在終濃度5mg/mL時NF

6、160基因有明顯上調(diào)現(xiàn)象,蛋白表達量也有顯著提升。核桃水提物促進神經(jīng)細胞突觸伸長可能跟NF16基因的上調(diào)有關。
　　(4)結(jié)合文獻及標品確定水提物中有己知成分胞苷、尿苷、鳥苷和腺苷。4種物質(zhì)細胞毒性實驗結(jié)果顯示腺苷終濃度在0.2μg/mL以上有細胞毒性,除此之外其他3種核苷并無明顯細胞毒性。該4種核苷按原始比例混合后處理細胞,細胞毒性實驗結(jié)果顯示,并無明顯毒性。4種核苷處理細胞1w后用顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)胞苷、尿苷和鳥苷均有促進細胞突觸