急性感染時(shí)中性粒細(xì)胞功能與活性的變化及其他外科臨床研究.pdf

1、研究背景：
　　 外科急性感染是一個(gè)非常復(fù)雜的機(jī)制,既存在細(xì)菌對(duì)機(jī)體組織的損傷,又有細(xì)胞的壞死及炎癥細(xì)胞的趨化侵潤(rùn)。在急性炎癥反應(yīng)中,中性粒細(xì)胞是免疫應(yīng)答第一道防線,起著關(guān)鍵的作用。
　　 中性粒細(xì)胞是具有遷移、變形、粘附和吞噬功能?，F(xiàn)今大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為,中性粒細(xì)胞具有很強(qiáng)的趨化作用,而對(duì)中性粒細(xì)胞起趨化作用的物質(zhì),稱之為中性粒細(xì)胞的趨化因子。由于中性粒細(xì)胞細(xì)胞膜上有趨化因子受體,通過(guò)受體與趨化因子結(jié)合,激活膜上的鈣泵,細(xì)

2、胞向前方伸出片足,最終細(xì)胞向產(chǎn)生趨化因子部位遷移。當(dāng)中性粒細(xì)胞與外源性異物接觸后,將異物包圍,形成含有異物的吞噬體或吞噬泡。中性粒細(xì)胞膜表面有IgG Fc受體和補(bǔ)體C3受體,可加速吞噬作用。被吞噬的異物裹有抗體和補(bǔ)體時(shí),與中性粒細(xì)胞膜上的相應(yīng)受體結(jié)合,而加強(qiáng)了細(xì)胞對(duì)它的吞噬作用,稱為調(diào)理作用。同時(shí),中性粒細(xì)胞本身細(xì)胞膜因?yàn)橥淌勺饔枚蓙y,引起呼吸爆發(fā),細(xì)胞耗氧量增加,產(chǎn)生大量的過(guò)氧化物及超氧化物等細(xì)胞毒性效應(yīng)分子,在殺死吞噬的細(xì)菌等異物

3、后,本身也死亡,成為膿細(xì)胞。中性粒細(xì)胞受到趨化因子作用遷移至病灶,并通過(guò)吞噬、調(diào)理作用及呼吸爆發(fā)等殺滅病原體及微生物,即為中性粒細(xì)胞在感染過(guò)程中發(fā)揮的最主要作用。其中,中性粒細(xì)胞趨化因子在啟動(dòng)免疫防御機(jī)制中至關(guān)重要。
　　 中性粒細(xì)胞死亡模式直接關(guān)系著炎癥反應(yīng)以及患者的預(yù)后:
　　 1)中性粒細(xì)胞不能及時(shí)清除壞死細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致膿腫和周圍組織損壞,并吸引更多的中性粒細(xì)胞；而提高中性粒細(xì)胞凋亡率,可明顯緩解這一現(xiàn)象。
　　

4、 2)巨噬細(xì)胞的吞噬是清除死亡中性粒細(xì)胞是一個(gè)重要的途徑,其清除的快慢與粒細(xì)胞凋亡的程度呈正相關(guān)。
　　 3)中性粒細(xì)胞是急性炎癥反應(yīng)的先鋒軍。在外科急性感染中,中性粒細(xì)胞是主要的效應(yīng)細(xì)胞,其死亡模式,會(huì)影響感染恢復(fù)快慢以及預(yù)后。
　　 目的：
　　 本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)室對(duì)中性粒細(xì)胞與壞死細(xì)胞關(guān)系的初步研究,以取得一些比較重要的資料,其后通過(guò)急性闌尾炎的臨床研究,得出相類似的數(shù)據(jù),同時(shí)為此類外科急性感染患者的抗感染

5、治療選擇、手術(shù)時(shí)機(jī)、手術(shù)方式及預(yù)后提供決策依據(jù)。
　　 方法：
　　 實(shí)驗(yàn)室分離液分離中性粒細(xì)胞及PBMC,通過(guò)56℃水煮法制作PBMC細(xì)胞壞死,并通過(guò)CFSE標(biāo)記以及CD15染色中性粒細(xì)胞,再用transwell證明壞死細(xì)胞對(duì)中性粒細(xì)胞的趨化性。
　　 CFSE染色壞死細(xì)胞與新鮮中性粒細(xì)胞共同培養(yǎng)1-24小時(shí),通過(guò)流式細(xì)胞儀及凋亡壞死檢測(cè)試劑盒觀察中性粒細(xì)胞吞噬壞死細(xì)胞情況及吞噬后死亡情況。
　　 通過(guò)

6、比較10例正常志愿者與10例20-40歲急性闌尾炎患者在感染期及恢復(fù)期中性粒細(xì)胞的吞噬功能與活性情況,證明中性粒細(xì)胞在感染中的地位與作用。
　　 結(jié)果：
　　 通過(guò)流式細(xì)胞儀,初步證明壞死細(xì)胞趨化中性粒細(xì)胞。
　　 中性粒細(xì)胞吞噬壞死細(xì)胞后會(huì)死亡,其死亡方式受時(shí)間及吞噬效果影響
　　 對(duì)于急性闌尾炎的研究,由于其他細(xì)胞可能干擾實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,分離液分離的中性粒細(xì)胞純度較低,僅有80％:而使用磁珠分選的中性粒

7、細(xì)胞的純度可達(dá)94.5％。在中性粒細(xì)胞分離中使用了磁珠分離,更好的保證了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。
　　 急性闌尾炎患者在感染期,中性粒細(xì)胞存活時(shí)間明顯長(zhǎng)于恢復(fù)期及健康志愿者,在體外培養(yǎng)72小時(shí)候,急性闌尾炎恢復(fù)期患者及健康志愿者的中性粒細(xì)胞已經(jīng)有70％左右發(fā)生死亡,而感染組僅有6.5％發(fā)生死亡。這可能與感染期中性粒細(xì)胞多為骨髓新生細(xì)胞有關(guān)。進(jìn)一步分析了各組細(xì)胞在功能上的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)感染組中性粒細(xì)胞的吞噬速度較恢復(fù)期組及健康志愿者組快在2小時(shí)

8、就達(dá)到了吞噬高峰而其他兩組在4小時(shí)才達(dá)到了吞噬高峰。在吞噬強(qiáng)度上各組也存在區(qū)別,感染組有9.27％的中性粒細(xì)胞發(fā)生了吞噬,而其他組中性粒細(xì)胞的吞噬率僅為6％左右。
　　 各組中性粒細(xì)胞吞噬珠子以后,死亡方式也各不相同。感染組中性粒細(xì)胞吞噬珠子后細(xì)胞多發(fā)生凋亡,而恢復(fù)期組及健康組多發(fā)生壞死。以4小時(shí)為例,檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率發(fā)現(xiàn):感染期組吞噬珠子的細(xì)胞凋亡率為81.45％,而恢復(fù)期及健康組凋亡率為30.34％,壞死率達(dá)到了63.5％

9、。
　　 結(jié)論：
　　 1、壞死細(xì)胞對(duì)中性粒細(xì)胞有趨化作用
　　 2、中性粒細(xì)胞的死亡模式受壞死細(xì)胞影響,若壞死細(xì)胞數(shù)量過(guò)多,難以被中性粒細(xì)胞完全吞噬清除,則中性粒細(xì)胞以壞死為主。隨著時(shí)間的進(jìn)展及對(duì)壞死細(xì)胞的清除,中性粒細(xì)胞最終壞死與凋亡趨于穩(wěn)定,并以細(xì)胞凋亡為主。
　　 3、急性闌尾炎,是外科急診中的常見(jiàn)疾病之一,而中性粒細(xì)胞在急性闌尾炎診斷和治療中扮演了重要角色。通過(guò)分析急性闌尾炎中性粒細(xì)胞不同時(shí)期細(xì)