人參皂甙Rd對結核感染后中性粒細胞的保護作用及功能的影響.pdf

1、“肺結核仍是全球最主要的健康問題之一，全球大約有1/3人口感染結核分枝桿菌，我國結核病疫情非常嚴重，患病人數(shù)位居為僅次于印度的世界第二，WHO將我國列入全球22個結核病高負擔國家之一，現(xiàn)我國大約有5億人感染結核分枝桿菌。我國每年新發(fā)肺結核患者約145萬，其中痰涂片陽性肺結核患者65余萬例。我國結核病原發(fā)耐藥率高達18．6％，是全球高發(fā)區(qū)，這些患者治療十分困難”[1]，結核病已成為我國健康和經(jīng)濟發(fā)展的重要問題。
　　在中國，幾千年來

2、人參作為傳統(tǒng)中草藥被廣泛應用，人參皂甙則是人參中最有效成分。分為三類，人參皂甙分別為二醇型，三醇型，齊墩果酸型，其中二醇型與三醇型目前認為是人參的主要活性成分[2]。包括了常見的Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2、Rh1及糖苷基 PT等。近年的研究表明人參皂甙Rd具有抗凋亡作用、抗炎作用、促進小膠質(zhì)細胞的吞噬作用、促進學習功能及抗氧化應激作用。
　　機體受到炎癥刺激后,中性粒細胞（neutrophils,PM

3、N）是首批從血液中遷移到微生物感染處的先天免疫細胞。作為專職吞噬細胞的中性粒細胞具有一系列受體可以識別調(diào)理素作用的微生物和未經(jīng)調(diào)理作用的微生物并促進其吞噬。這些被吞噬的微生物，大多數(shù)與中性粒細胞吞噬體與溶酶體融合后被迅速殺死。除了直接殺滅微生物的作用,中性粒細胞還會對微生物模式識別受體做出反應，分泌趨化因子和促炎細胞因子吸引其他免疫細胞。之前的研究表明人參皂甙Rd具有抗凋亡、抗炎作用，本課題研究人參皂甙 Rd對正常中性粒細胞及結核感染后

4、的中性粒細胞的凋亡變化的影響及其可能的機制，以及對中性粒細胞功能的影響。
　　實驗一人參皂甙Rd對結核感染中性粒細胞模型中對中性粒細胞凋亡水平的影響
　　目的：研究人參皂甙 Rd對健康成年人外周血、結核感染模型的中性粒細胞凋亡率的影響。
　　方法：抽取健康成年人外周血，提取中性粒細胞，分為正常中性粒細胞組、人型結核分枝桿菌減毒株(H37Ra)感染中性粒細胞模型組和人體皮下注射用卡介苗(BCG)感染中性粒細胞組。采用CC

5、K8法、流式細胞術，免疫細胞化學染色，檢測了各組中性粒細胞的細胞活力及細胞凋亡水平。
　　結果：給予各組中性粒細胞人參皂甙Rd（100uM），相對于對照組細胞凋亡率顯著降低，細胞活力明顯提高。
　　結論：人參皂甙Rd能夠抑制正常和結核感染模型的中性粒細胞的凋亡，提高細胞存活率，延長細胞存活時間。
　　實驗二人參皂甙Rd對結核感染后中性粒細胞的保護機制
　　目的：在人參皂甙Rd對正常中性粒細胞和結核感染模型的中性粒

6、細胞具有抑制細胞凋亡、延長中性粒細胞壽命作用基礎上進一步研究人參皂甙Rd對中性粒細胞保護作用的機制。
　　方法：抽取健康成年人外周血，提取中性粒細胞，分為正常中性粒細胞組和結核感染中性粒細胞模型組，加入磷脂酰肌醇-3-羥激酶（phosphatidylinositol3-hydroxy kinase,PI3K）/絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶(serine and threonine protein kinase，AKT)抑制劑 LY294

7、002或細胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(extracellular signal-regulated kinas1/2,ERK1/2)抑制劑 PD98059和人參皂甙 Rd，采用流式細胞術，免疫細胞化學染色，檢測了各組中性粒細胞的細胞活力及細胞凋亡水平。
　　結果：給予 PI3K/AKT抑制劑LY294002或ERK1/2抑制劑PD98059和人參皂甙Rd的中性粒細胞相對于單純給予人參皂甙Rd的細胞凋亡率增高。
　　結論：人參皂甙

8、Rd抑制正常和結核感染模型的中性粒細胞的凋亡可能是通過PI3K/AKT和ERK1/2途徑實現(xiàn)的。
　　實驗三人參皂甙Rd對中性粒細胞功能的作用
　　目的：觀察人參皂甙Rd對中性粒細胞對BCG或H37Ra吞噬作用的影響。
　　方法：用H37Ra/BCG感染中性粒細胞，采用流式細胞術測細胞吞噬率；用改良抗酸染色法測細胞吞噬指數(shù)。
　　結果：人參皂甙Rd組（100uM）中性粒細胞的吞噬率、吞噬指數(shù)較對照組明顯升高。