全反式維甲酸誘導(dǎo)同種心臟移植耐受.pdf

1、目的：全反式維甲酸(At-RA)是維生素A的代謝產(chǎn)物，它具有抑制炎癥、調(diào)節(jié)免疫和誘導(dǎo)細(xì)胞分化等作用。而炎癥和免疫因素是器官移植排斥反應(yīng)的主要致病原因。因此，本研究在小鼠異位心臟移植模型上探討At-RA對(duì)器官移植排斥反應(yīng)的作用。
　　 方法：本研究以C57BL/6小鼠為受體，BALB/c或C3H/He小鼠為供體建立了小鼠腹腔心臟移植模型。在急性排斥反應(yīng)模型，從心臟移植前1天開始受體小鼠每天經(jīng)口給予At-RA(3 mg·kg-1)或

2、玉米油0.2ml，觀察移植物存活時(shí)間。移植術(shù)后第7天，摘取供心行組織病理學(xué)、免疫組化和western blot檢查。并摘取受體小鼠脾臟，分別用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)、western blot和流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞增殖反應(yīng)、細(xì)胞因子和免疫細(xì)胞的檢測。在慢性排斥反應(yīng)模型，對(duì)照組小鼠術(shù)后第1，3，5天腹腔注射CD154單克隆抗體MR1(10mg·kg-1)，實(shí)驗(yàn)組小鼠在對(duì)照組的基礎(chǔ)上從移植前1天開始每天經(jīng)口給予At-RA (3 mg·kg-1)，連續(xù)

3、給予60天，觀察移植物存活時(shí)間。移植術(shù)后第100天，摘取供心行組織病理學(xué)、免疫組化和PCR檢查。然后我們從經(jīng)At-RA干預(yù)的移植物長期存活的受體小鼠分離CD11c+樹突狀細(xì)胞(DC)，并將其過繼轉(zhuǎn)移到剛接受心臟移植的受體小鼠體內(nèi)，觀察移植物存活時(shí)間。移植術(shù)后第7天，收集受體小鼠的脾細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行免疫細(xì)胞的檢測。
　　 結(jié)果：在急性排斥反應(yīng)模型，At-RA組的移植物存活時(shí)間比對(duì)照組顯著延長(95.17±12.40天vs9.

4、67±0.62天, P<0.05)，移植物排斥反應(yīng)分級(jí)評(píng)分顯著降低。與對(duì)照組相比，At-RA組受體小鼠的脾細(xì)胞對(duì)供體(BALB/c)脾細(xì)胞的增殖反應(yīng)較低，但對(duì)第三方(C3H/He)來源的脾細(xì)胞的增殖反應(yīng)無差別。At-RA組受體小鼠的脾臟CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)T細(xì)胞(Treg)的比例顯著高于對(duì)照組，而CD4+IL-17+Th17細(xì)胞的比例顯著低于對(duì)照組。At-RA組心臟移植物Foxp3的表達(dá)顯著高于對(duì)照組。At-RA組受體小鼠

5、的脾臟和心臟移植物TGF-β蛋白的表達(dá)顯著高于對(duì)照組，而IL-6蛋白的表達(dá)顯著低于對(duì)照組。At-RA組受體小鼠的脾臟CD11c+DC表面CD40、CD80、CD86和MHC II的表達(dá)較對(duì)照組顯著降低。在慢性移植模型，At-RA組移植物的管腔阻塞率、內(nèi)膜與中膜面積之比、移植物纖維化區(qū)域、CD4和CD8陽性細(xì)胞浸潤以及IFN-γ和IL-10mRNA表達(dá)較對(duì)照組均明顯降低。CD11c+DC過繼轉(zhuǎn)移顯著延長了BALB/c來源的供心的存活時(shí)間，