藻藍蛋白聯(lián)合全反式維甲酸抗腫瘤分子機制研究.pdf

1、目的:研究藻藍蛋白(C-phycocyanin，C-PC)和全反式維甲酸(all-transretinoic acid，ATRA)單獨及聯(lián)合用藥對腫瘤細胞體內(nèi)外生長的影響，并對其抗腫瘤作用機制進行探討。
　　方法:MTT法檢測ATRA和C-PC單獨及聯(lián)合用藥對宮頸癌HeLa細胞和肺癌A549細胞生長的影響，TUNEL法檢測細胞凋亡情況，免疫組化和Westren blot法檢測Bcl-2和Caspase-3蛋白的表達，原位雜交和免疫

2、熒光法檢測CDK-4 mRNA和Cyclin D1蛋白水平，RT-PCR法檢測CD59基因的表達。然后將HeLa細胞注射入NU/NU裸鼠左側(cè)腋窩皮下構(gòu)建荷瘤小鼠模型，經(jīng)藥物干預后檢測瘤塊和脾臟重量，特異玫瑰花環(huán)形成實驗和MTT法檢測T淋巴細胞和脾臟細胞的活性，ELISA法檢測脾臟細胞培養(yǎng)上清液中TNF的含量，免疫組化和免疫熒光法檢測瘤塊內(nèi)Bcl-2和Cyclin D1基因的表達。
　　結(jié)果:ATRA和C-PC在體內(nèi)和體外均具有抑制

3、腫瘤細胞生長的作用，當達到相同的抑制率時，聯(lián)合C-PC使用可以顯著降低ATRA的使用劑量從而達到降低毒副作用的目的。兩種藥物聯(lián)合用藥處于中高抑制率時為協(xié)同作用。聯(lián)合用藥可以顯著下調(diào)抗凋亡Bcl-2和增加促凋亡Caspase-3蛋白的表達，抑制細胞周期相關CDK-4和Cyclin D1蛋白的表達，抑制補體調(diào)節(jié)蛋白CD59的表達。ATRA單獨使用會對脾臟和T細胞的活性產(chǎn)生影響，而兩者聯(lián)合用藥則對脾臟生長和T細胞活性具有促進作用，并可顯著促進