羊棲菜多酚粗品的純化及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、多酚類化合物具有抗氧化、抗腫瘤、抑菌、抗病毒、抗凝血等多種生物活性，已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)。褐藻是天然多酚的重要來(lái)源，在已報(bào)道的褐藻種類中，生長(zhǎng)于溫帶-亞熱帶的羊棲菜是具有高酚含量的代表性種屬。本實(shí)驗(yàn)選用羊棲菜為實(shí)驗(yàn)原料，通過(guò)單因素試驗(yàn)結(jié)合正交試驗(yàn)，考察了料液比、提取時(shí)間、提取溫度和乙醇濃度對(duì)多酚提取得率的影響，建立了羊棲菜多酚的最佳提取工藝；使用分級(jí)萃取、萃取-樹(shù)脂聯(lián)用和Sevag處理法對(duì)羊棲菜多酚粗品進(jìn)行純化，并針對(duì)萃取-樹(shù)脂聯(lián)

2、用法建立了優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)方法；對(duì)3種提取方法所得的七個(gè)組分進(jìn)行了HPLC分析，并考察了其體外對(duì)HepG2、RAW264.7、HT29和A-549四種腫瘤細(xì)胞的抑制作用。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴得到了羊棲菜多酚優(yōu)化的提取工藝為：乙醇濃度45％；料液比1:30；提取時(shí)間7h；提取溫度70℃。在此最佳提取工藝條件下，總酚含量為4.85±0.06mgGA/g，樣品凍干后檢測(cè)總酚含量為1.5%。⑵采用了3種方法對(duì)多酚粗提物進(jìn)一步分離：a.以

3、乙酸乙酯、正丁醇對(duì)多酚粗品進(jìn)行分級(jí)萃取，得到乙酸乙酯相(E1)、正丁醇相(E2)和水相(E3)三個(gè)組分；b.以乙酸乙酯對(duì)多酚粗品進(jìn)行初步萃取，再以大孔樹(shù)脂ADS-21對(duì)其水相進(jìn)行分離純化，具體分離的優(yōu)化條件為，使用大孔樹(shù)脂ADS-21，上樣流速1mL/min、上樣體積0.3BV、上樣液pH4.5、70%乙醇為洗脫劑、洗脫流速1mL/min、洗脫體積為2.6BV，此萃取-樹(shù)脂聯(lián)用法分離純化得峰1(R1)和峰2(R2)兩個(gè)組分；c.以Sev

4、ag法結(jié)合乙醇沉淀對(duì)多酚粗品進(jìn)行分離得0-70%醇沉物(S1)和70-90%醇沉物(S2)兩個(gè)組分。上述7個(gè)組分的多酚純度分別為8.8%、6.1%、3.8%、6.9%、4.0%、4.6%、5.3%均高于粗提物。對(duì)這7個(gè)組分進(jìn)行了高效液相分析，除E1外，均適用HILIC色譜柱分析。⑶體外抗腫瘤活性研究表明，上述七個(gè)組分在0.8mg/mL的濃度下，對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖均具有不同抑制作用。具體為：羊棲菜的多酚粗品(C1)，僅對(duì)RAW264.7具有明