銅綠假單胞菌彈性蛋白酶活性相關(guān)基因PA4735功能的研究.pdf

1、銅綠假單胞菌是一種廣宿主條件致病菌，是一種可以引起嚴(yán)重醫(yī)院內(nèi)獲得性感染的常見病原菌，在臨床上常引起難治性和頑固性感染。眾多毒力因子的產(chǎn)生和存在是銅綠假單胞菌具有感染性和致病性的重要因素，而彈性蛋白酶是其重要的毒力因子之一。本研究以一株臨床分離株P(guān)． aeruginosa PA68為原始菌株，利用Mu轉(zhuǎn)座重組技術(shù)構(gòu)建了P．a(chǎn)eruginosa PA68突變子文庫。從文庫中篩選得到一株水解彈性蛋白能力缺陷的突變株M44。
　　 對(duì)突

2、變株M44通過基因克隆、核苷酸序列分析，確定了Mu在基因組上的插入位點(diǎn)為PA4735基因。PA4735I基因?qū)儆冖纛惢颍蛉L3267bp，編碼1088個(gè)氨基酸，定位于細(xì)胞質(zhì)膜。其上下游基因PA4734和PA4736都是功能完全未知的Ⅳ類基因。本文分別從正反兩方面，使用遺傳互補(bǔ)、同源重組方法對(duì)PA4735的功能進(jìn)行測(cè)定。目前敲除株尚未得到，表型上得到了部分互補(bǔ)，正在進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 為了研究PA4735基因在調(diào)控彈性蛋白酶表

3、達(dá)過程中的途徑和該基因在群體密度感應(yīng)系統(tǒng)中的地位和作用，本文構(gòu)建了三個(gè)群體密度感應(yīng)系統(tǒng)相關(guān)基因及彈性蛋白酶結(jié)構(gòu)基因的融合質(zhì)粒。通過檢測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)分析PA4735基因的失活產(chǎn)生對(duì)其它基因轉(zhuǎn)錄水平的影響。PA4735基因的突變，抑制了lasB基因的轉(zhuǎn)錄水平。PA4735 mutant中l(wèi)asI,vqsR的轉(zhuǎn)錄水平分別比野生型菌株中的轉(zhuǎn)錄水平大幅下降了。推測(cè)PA4735基因很有可能通過調(diào)控vqsR、lasI的QS環(huán)路從而調(diào)控lasB基因的