右旋糖酐酶純化與表征.pdf

1、右旋糖酐酶(Dextranase，EC3.2.1.11)是一種特異性水解α-1，6-糖苷鍵的蛋白酶，可以在相對溫和的條件下對右旋糖酐進行高效率的催化水解。在甘蔗制糖工業(yè)中，由于甘蔗砍收后長期堆放，車間設備衛(wèi)生條件不佳等原因會導致微生物感染后產(chǎn)生大量的右旋糖酐，而右旋糖酐會對后續(xù)工段的制糖工藝流程造成一系列干擾，最終導致了糖分回收率的下降以及產(chǎn)品質(zhì)量的降低右旋糖酐酶可以作為生物助劑加入到制糖工藝當中，解決右旋糖酐所引起的一系列問題，因此研

2、究其發(fā)酵生產(chǎn)、提取純化以及相關酶學性質(zhì)和保存方法都有相當?shù)囊饬x。
　　 本文主要研究為使用畢赤酵母工程菌對右旋糖酐酶進行組成型表達后的分離純化工作，即先通過選擇性沉淀、超濾的方法對發(fā)酵液進行初步分離;然后，進一步嘗試使用雙水相萃取法，通過不同鹽類、不同分子量的高聚物以及改變pH等方式，建立一套高效萃取右旋糖酐酶的工藝參數(shù)。
　　 其中，使用PEG4000-(NH4)2SO4雙水相系統(tǒng)進行萃取，將PEG4000和(NH4)

3、2SO4終濃度都控制在13％，對粗酶液的萃取率和回收率都超過95％;最后，針對右旋糖酐酶的相關酶學性質(zhì)進行研究，確定其酶促反應的最優(yōu)條件是45℃、pH為5.5以及底物濃度20mg/mL。酶蛋白活性受到Fe3+和Cu2+的抑制，而同時Mn2+和Fe2+則起到一定的促進作用。在保存穩(wěn)定性上，右旋糖酐酶不耐受30℃以上的環(huán)境溫度，在4℃的偏酸性(pH5.0～5.8)環(huán)境中則可以長期保持穩(wěn)定;在室溫下進行保存時，加入30％的甘油，可使酶液在5周