腫瘤相關(guān)糖抗原KH-1的酶法合成研究.pdf

1、腫瘤相關(guān)糖抗原(tumor-associated carbohydrate antigens，TACAs)是一種在腫瘤細(xì)胞表面過度表達的糖鏈結(jié)構(gòu)，通常以糖脂、糖蛋白的形式存在。這些非正常的糖基化與腫瘤的轉(zhuǎn)移、信號傳導(dǎo)有著密切的聯(lián)系。將TACAs與載體蛋白結(jié)合用于刺激機體，就有可能引起免疫應(yīng)答，產(chǎn)生特異性的針對腫瘤細(xì)胞的抗體。因此獲得結(jié)構(gòu)確定、均一的糖抗原，對于研究其生物活性、研發(fā)抗腫瘤疫苗和利用糖芯片進行診斷分析，進而治療癌癥，有著重大

2、的意義。
　　在TACAs中，Lewis抗原占多數(shù)。例如Lewis x(Lex)，Lewisy(Ley)， sialylLewis x(SLex)， sialyl Lewis a(SLea)和KH-1等。KH-1抗原是一種主要過度表達在乳腺癌和前列腺癌細(xì)胞表面的腫瘤相關(guān)九糖抗原[Fucα(1→2)]Galβ(1→4)[Fucα(1→3)]GlcNAcβ(1→3)Galβ(1→4)[Fucα(1→3)]GlcNAcβ(1→3)Gal

3、β(1→4)GlcβOCer。KH-1包含Ley，即[Fucα(1→2)]Galβ(1→4)[Fucα(1→3)]GlcNAc結(jié)構(gòu)和Lex，即Galβ(1→4)[Fucα(1→3)]GlcNAc結(jié)構(gòu)。KH-1最早是從人的結(jié)腸癌細(xì)胞中分離出來，進一步研究發(fā)現(xiàn)KH-1僅僅在腺癌細(xì)胞表面被發(fā)現(xiàn)，而從未在正常的結(jié)腸組織中發(fā)現(xiàn)，因此它是腺癌免疫療法的潛在靶點。然而，應(yīng)用這類基于KH-1抗原的免疫方法，卻面臨著一大困難，即糖抗原的大量獲得、免疫學(xué)性

4、質(zhì)的鑒定和結(jié)構(gòu)表征是一項復(fù)雜和具有挑戰(zhàn)性的工作。由于糖抗原的微觀不均一性，從自然來源提取分離糖抗原是非常困難的。采用人工合成的方法能極大的提高效率，靈活的得到特定結(jié)構(gòu)的寡糖。近十多年以來，有多個研究小組分別采取不同的策略，運用化學(xué)法合成了KH-1,并進行了活性研究。研究結(jié)果表明KH-1與KLH偶聯(lián)所制備的糖疫苗能引起強烈的免疫反應(yīng)，有望發(fā)展成為新型糖疫苗。然而前人的合成工作都選擇了化學(xué)合成的方法，由于化學(xué)合成不可避免的保護與脫保護操作，

5、導(dǎo)致合成步驟繁瑣且總收率低，同時對操作者的要求也很高。
　　相較于化學(xué)合成，酶法合成由于酶的高效性、專一性等特點，表現(xiàn)出了其獨特的優(yōu)勢。因此我們選擇了酶法，應(yīng)用一鍋多酶(One-pot-multienzyme，OPME)體系，分步高效的合成了KH-1。
　　本論文以3-疊氮基丙基乳糖苷為起始原料，首先應(yīng)用一鍋多酶體系，四步反應(yīng)合成出了六糖骨架，之后兩步巖藻糖化反應(yīng)，總共六步得到了目的產(chǎn)物。在進行酶法反應(yīng)時，以廉價的單糖開始，