熱穩(wěn)定性磷脂酶C生產(chǎn)菌的分離鑒定及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、磷脂酶是一種與磷脂代謝相關(guān)的酶，能催化甘油磷脂的水解反應(yīng)，水解產(chǎn)物是各種磷脂酸（膽堿、絲氨酸）和氨基醇（乙醇胺）。根據(jù)其水解磷脂位點(diǎn)的不同可以分為磷脂酶A1、A2、B1、B2、C、D，磷脂酶的商業(yè)應(yīng)用前景廣泛。例如PLA1、PLA2、 PLC和PLD可以被廣泛應(yīng)用于油脂精練、磷脂改性、食品及農(nóng)業(yè)殺蟲劑等方面，PLC可以被應(yīng)用于抗腫瘤藥物，尤其在植物油脫膠等方面有廣闊的應(yīng)用前景，磷脂酶廣泛存在于動(dòng)物、植物和微生物中。微生物來(lái)源的磷脂酶種類

2、較多，易于大規(guī)模生產(chǎn)，并成為工業(yè)用酶的最主要來(lái)源。
　　本課題采用卵黃平板法從甘肅周邊不同來(lái)源土壤樣品中分離得到80株磷脂酶C生產(chǎn)菌株，經(jīng)復(fù)篩得到一株磷脂酶C產(chǎn)量較高且該酶具有熱穩(wěn)定性的菌株JYSY1。并對(duì)菌株JCSY1進(jìn)行了菌落形態(tài)觀察（菌落大小、顏色、凸起、邊緣形狀）、革蘭氏染色、芽孢染色、生理生化分析、16S rDNA序列同源性分析，初步鑒定菌株JYSY1是蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)。該菌株的最適生長(zhǎng)溫度

3、及培養(yǎng)時(shí)間分別為25℃，24h;最佳產(chǎn)酶溫度及培養(yǎng)時(shí)間分別為30℃，30h;最適生長(zhǎng)初始pH值為7.0;最佳產(chǎn)酶初始pH值為7.0。本文采用(NH4)2SO4鹽析、DEAE-Sepharose Fast Flow陰離子交換、Sephadex G-100凝膠層析從菌株JYSY1的發(fā)酵上清液中分離純化得到了磷脂酶C。并通過(guò)SDS-PAGE電泳法對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)蛋白Marker測(cè)得其分子量約為48kDa，該酶的最適作用溫度為50℃，最適作用的pH為8

4、.0，當(dāng)磷脂酶C在pH為8.0左右時(shí)酶活力比較穩(wěn)定。Co2+和Ca2+的終濃度為0.1mmol/L時(shí)對(duì)酶促反應(yīng)有促進(jìn)作用，酶活力分別提高到111.59％，110.11％。Zn2+、Mg2+對(duì)酶有抑制作用，當(dāng)Zn2+、Mg2+終濃度達(dá)到1mmol/L時(shí)酶活力分別為58.13％，62.65％。因此Zn2+、Mg2+終濃度越大，抑制作用越明顯。SDS、EDTA、EGTA均對(duì)磷脂酶C有抑制作用，PMSF對(duì)酶活力影響不大。該酶熱穩(wěn)定性較好，65℃