雙組分系統(tǒng)HPK1-RR1耐酸調(diào)控基因鑒定.pdf

1、德氏乳桿菌保加利亞亞種（Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus）廣泛應(yīng)用于各種乳制品的制作過程中，是發(fā)酵酸奶過程中必不可少的菌株。乳酸菌在自身的生長或發(fā)酵過程中，其代謝過程都會(huì)產(chǎn)生乳酸，對菌體自身生長產(chǎn)生抑制作用。因此該菌的耐酸能力的研究十分重要。
　　細(xì)菌在經(jīng)過酸誘導(dǎo)后，其耐酸能力會(huì)大幅度提高，細(xì)菌生理會(huì)發(fā)生較大變化。在適應(yīng)低pH值的過程中，細(xì)菌的生理發(fā)生利于細(xì)菌生存能力提高的改變。

2、酸誘導(dǎo)條件可以更好的模擬菌體受到外界低pH影響時(shí)的酸耐受反應(yīng)（acid tolerance response，ATR），從而可以更全面揭示在受到酸誘導(dǎo)后，細(xì)菌生存能力提高過程中可能參與的基因。因此，本研究選擇在酸誘導(dǎo)后，研究野生型CH3、突變體CH3-H、突變體CH3-R在72個(gè)特定基因表達(dá)量方面的差異，經(jīng)過本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果自身比較并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室前期研究自然發(fā)酵條件下的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，研究雙組分系統(tǒng)HPK1/RR1激活或抑制表達(dá)的基因。

3、　　酸誘導(dǎo)處理后，HPK1突變體CH3-H、RR1突變體CH3-R相比于野生型CH3菌株有多個(gè)基因表達(dá)量出現(xiàn)變化，主要涉及細(xì)胞分裂及細(xì)胞膜、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、丙酮酸和乙酰輔酶A代謝、脂質(zhì)代謝、多肽轉(zhuǎn)運(yùn)及降解、分子伴侶、質(zhì)子泵等。其中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、丙酮酸和乙酰輔酶A代謝中的多個(gè)基因表達(dá)量變化，推測突變后可能影響了信號(hào)傳遞過程及菌體產(chǎn)能，導(dǎo)致菌體生長緩慢。通過與本實(shí)驗(yàn)前期結(jié)果進(jìn)行比較，相比于正常發(fā)酵情況下，酸誘導(dǎo)后下野生型CH3菌株、HPK1突變體、R

4、R1突變體也出現(xiàn)多個(gè)基因表達(dá)量變化，且相比于自然發(fā)酵條件下變化的基因更多，推測是酸誘導(dǎo)表達(dá)的結(jié)果。綜合以上結(jié)果，表明雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)HPK1/RR1對德氏乳桿菌保加利亞亞種CH3的耐酸調(diào)控是通過對多個(gè)代謝途徑進(jìn)行綜合調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)的。
　　本實(shí)驗(yàn)對cDNA-AFLP技術(shù)進(jìn)行了摸索，已經(jīng)確定了實(shí)驗(yàn)條件。采用該技術(shù)篩選HPK1/RR1參與的德氏乳桿菌保加利亞亞種酸調(diào)控過程中的未知基因進(jìn)行了初步的探索，后期可進(jìn)行cDNA-AFLP技術(shù)篩選未