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文檔簡介
1、單增李斯特菌(Listeria monocytogenges, Lm)是導(dǎo)致人獸共患病-李斯特菌病(Listeriosis)的食源性病原菌。Lm的易感者為免疫缺陷和免疫力低下者。李斯特菌病雖患病率不高,但患病死亡率可達(dá)20%~30%。近幾年,我國不斷有人和動物李斯特菌病病例的報道,Lm對我國人民健康的威脅和畜牧業(yè)發(fā)展的影響不容小覷。因此,重視Lm致病機(jī)制的研究勢在必行。雙組分信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)(TCS)普遍存在于細(xì)菌中,與病原菌的毒力因子表達(dá)
2、密切相關(guān)。因此,研究Lm的TCS是探究Lm致病機(jī)理的重要方面。本研究應(yīng)用生物信息學(xué)方法對Lm的食品分離株LM201的TCS進(jìn)行了統(tǒng)計和分析,發(fā)現(xiàn)一對TCS--RS11570/RS11565的功能未知。本研究構(gòu)建了調(diào)節(jié)蛋白基因RS11565的突變菌株,考察了突變株的部分生物學(xué)特性,初步探明了該TCS與Lm毒力的相關(guān)性,以期給Lm致病機(jī)理補充新的信息。研究工作及其結(jié)果如下。
1.LM201基因組TCSs的分析
根據(jù)LM2
3、01的基因組信息,應(yīng)用生物信息學(xué)方法發(fā)現(xiàn),LM201的TCS數(shù)目為14對HK/RR和2個孤兒RR;HKs包含11種組成結(jié)構(gòu),RRs分屬于7個亞家族;HKs和RRs的進(jìn)化關(guān)系一致;功能預(yù)測發(fā)現(xiàn)LM201中存在1對功能未知TCS--RS11570/RS11565。
2.RS11565基因缺失突變菌株S4070的構(gòu)建
以LM201基因組為模板,擴(kuò)增RS11565上下游同源臂,構(gòu)建了重組自殺質(zhì)粒p3007,電轉(zhuǎn)p3007入L
4、M201,篩選發(fā)生同源重組的轉(zhuǎn)化子,獲得突變菌株S4070。
3.突變菌株S4070的生物學(xué)特性
對S4070生長曲線和主要生化特性進(jìn)行了測定,發(fā)現(xiàn)S4070與親本株LM201的生長速率和主要生化特性一致。
用線蟲C.elegans N2和小鼠分別對S4070進(jìn)行了毒力測定。線蟲試驗結(jié)果:LM201組和S4070組線蟲的平均壽命均為12.0 d,E.coli OP50對照組線蟲的平均壽命為15.5 d,LM
5、201組和S4070組線蟲的壽命顯著短于對照組,但LM201組與S4070組間差異不顯著。小鼠試驗結(jié)果:LM201的LD50為1.55×106 CFU,S4070的為4.37×105 CFU,統(tǒng)計分析表明二者的LD50差異不顯著。
對S4070進(jìn)行了小鼠肝臟和脾臟組織載菌量測定。結(jié)果顯示:72h時,肝臟中LM201載菌量為2.76×107~3.64×107 CFU/g,S4070載菌量為1.95×108~3.61×108CFU
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