單增李斯特菌雞卵黃抗體的抑菌性能及其機(jī)理研究.pdf

1、單增李斯特菌是水產(chǎn)食品中最為常見的致病菌之一,其生長的溫度范圍廣,在4℃的普通冷藏條件下能夠緩慢生長繁殖,在動物養(yǎng)殖及鮮活產(chǎn)品儲運(yùn)過程中往往難以有效控制其污染和安全危害。卵黃抗體(IgY)作為禽類蛋黃中存在的唯一一種免疫球蛋白,不僅能與其抗原菌特異性的結(jié)合,而且結(jié)合后還能夠抑制抗原菌的生長,是一種潛在的食品微生物抑菌劑。
　　 本研究以單增李斯特菌作為菌體抗原免疫蛋雞制備IgY,并針對高純度特異性IgY的制備純化及其生物活性展開

2、研究探討,研究其對于水產(chǎn)品樣本中單增李斯特菌的免疫親和能力以及生長抑制效果,并對IgY的抑菌機(jī)理進(jìn)行探討,初步驗證其應(yīng)用于水產(chǎn)品加工儲藏和分析檢測的可行性,同時為水產(chǎn)品中其他致病菌和腐敗菌的有效控制提供技術(shù)參考,論文的主要研究成果如下:
　　 以單增李斯特菌為抗原免疫產(chǎn)蛋母雞,比較不同方法對于雞卵黃中單增李斯特菌IgY的分離效果,研究IgY在雞蛋中產(chǎn)生的免疫應(yīng)答過程,分析確定所得IgY的主要理化性質(zhì)。結(jié)果表明,采用硫酸銨鹽析法可

3、以取得較好的提取純化效果,提取液中的IgY效價高且蛋白組分較為單一,IgY具有較好的理化穩(wěn)定性,在pH 3～9范圍內(nèi)的抗體活性能夠保持在70％以上,經(jīng)60℃、4 h處理后免疫活性仍然良好。
　　 IgY對單增李斯特菌的生長有顯著的抑制作用,在液體培養(yǎng)基中添加IgY,可有效抑制單增李斯特菌的生長,而且抗體濃度越大,抑菌效果越明顯,培養(yǎng)基中添加200 mg/mL的IgY,37℃下孵育8小時,單增李斯特菌細(xì)胞數(shù)量減少90％,4℃下孵育

4、120小時,單增李斯特菌細(xì)胞數(shù)量也可減少50％;固體培養(yǎng)基經(jīng)200 mg/mL的IgY浸泡30分鐘后,可使單增李斯特菌細(xì)胞數(shù)量減少80％以上;采用200 mg/mL的IgY處理過的新鮮三文魚和煙熏三文魚,真空包裝后在6±1℃條件下儲存15天,單增李斯特菌的細(xì)胞數(shù)量較空白對照可以降低兩個對數(shù)單位,證實了IgY作為食品中致病菌抑制劑的可行性。
　　 通過對單增李斯特菌菌體細(xì)胞的預(yù)處理,建立了兩種免疫親和純化方法對特異性IgY進(jìn)行分離

5、純化,并對純化后抗體的性能進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,兩種方法均成功對特異性IgY和非特異性IgY進(jìn)行了有效分離;相同濃度的IgY,純化后抗體效價較純化前提高了大約4倍;在以新鮮牛奶為樣本的抑菌實驗中,50mg/mL的純化后IgY的抑菌性能要比純化前200 mg/mL IgY的抑菌性能高,純化后的抑菌效率較純化前提高4倍以上。
　　 對IgY的抑菌機(jī)理進(jìn)行研究探討,透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn),單增李斯特菌經(jīng)200mg/mL IgY處理6小時后,