發(fā)酵豆制品中乙酰膽堿酯酶抑制劑的分離純化研究.pdf

1、發(fā)酵豆制品具有多種保健功能,如降血壓、降血糖、降血脂、抗氧化、溶解血栓、抗癌、抗老年性癡呆和抗菌等。本文主要從發(fā)酵豆制品可以抗老年性癡呆癥的角度,研究了發(fā)酵豆制品中的乙酰膽堿酯酶抑制劑篩選方法的建立,提取工藝優(yōu)化,分離純化的探討等,主要研究結(jié)果如下:
　　 ⑴篩選方法的建立。建立基于分光光度法的乙酰膽堿酯酶抑制劑體外篩選模型,發(fā)現(xiàn)AchE濃度同OD值成正比例關(guān)系,即可用OD值表示酶活：通過薄層層析-生物自顯影實驗表明,利用Ell

2、man試劑作為反應(yīng)試劑,具有較好的顯色效果。選用分光光度法測定不同地域的豆豉和腐乳提取物對乙酰膽堿酯酶的抑制活性,結(jié)果表明,重慶永川豆豉提取物在1.0 mg／mL時對乙酰膽堿酯酶的抑制率最高為52.36％。
　　 ⑵提取工藝優(yōu)化。采用乙醇回流提取工藝從豆豉中提取乙酰膽堿酯酶抑制劑,通過單因素實驗和正交實驗優(yōu)化豆豉中乙酰膽堿酯酶(AchE)抑制劑的提取工藝,并通過分光光度法測定豆豉提取物對AchE的抑制能力。結(jié)果表明最佳提取工藝為

3、:提取時間為90min、料液比為1:12、提取溫度為75℃、乙醇的濃度為80％。按照工藝優(yōu)化出來的條件,進行了驗證性實驗,測得豆豉中乙酰膽堿酯酶抑制劑在1.0 mg／mL時的抑制率為53.40％。
　　 ⑶分離純化的探討。選用重慶永川豆豉作為分離材料,對其具體的活性單體進行了系統(tǒng)的分離工作,采用萃取,大孔吸附樹脂富集,硅膠柱層析,SephadexLH-20層析和重結(jié)晶等手段。選用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取后,活性部位

4、主要分布在石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯中,通過對石油醚組分進行純化,最后得到2個高活性組分,分別為白色晶體(1)和白色粉末(2),用10％的乙醇稀釋成1.0mg／mL,其對乙酰膽堿酯酶的抑制率分別為:95.27％和100.00％。通過對二氯甲烷組分進行純化,最后得到1個高活性組分,為淡黃色粉末。用10％的乙醇稀釋成1.0mg／mL,對乙酰膽堿酯酶的抑制率為100.00％。活性相對于純化前有很大的提高。
　　 ⑷將分光光度法、薄層層