GRAF基因啟動(dòng)子甲基化在造血系統(tǒng)髓系腫瘤中的意義.pdf

1、目的：研究造血系統(tǒng)腫瘤骨髓增生異常綜合征(myelodys-plastic syndrome,MDS)、急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)和慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中粘著斑激酶相關(guān)性鳥苷三磷酸酶調(diào)節(jié)因子(GTPase regulatorassociated with the focal adhesion kinase,GRAF)基因啟動(dòng)子區(qū)域的甲基

2、化狀況,并分析其臨床相關(guān)性。
　　 方法：建立并應(yīng)用甲基化特異性PCR(methylation-specificPCR,MSP)技術(shù)對(duì)68例MDS患者、132例AML患者、61例CML患者及20例對(duì)照組骨髓單個(gè)核細(xì)胞標(biāo)本的GRAF基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)進(jìn)行檢測；建立EvaGreen染料法實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-timequantitative PCR,RQ-PCR),對(duì)71例AML患者和21例良性血液病患者中GRAF轉(zhuǎn)錄本

3、水平進(jìn)行檢測。
　　 結(jié)果：20例對(duì)照組均未發(fā)生GRAF基因啟動(dòng)子甲基化,但在血液系統(tǒng)腫瘤患者中均有不同程度的6RAF基因甲基化:①68例MDS患者中28例(41.2％)發(fā)生了GRAF基因甲基化,GRAF基因甲基化改變與MDS患者的性別、年齡、血象、染色體異常等結(jié)果均無相關(guān)性(P>0.05)；GRAF基因甲基化頻率在難治性貧血/伴有環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞的難治性貧血(refractory anemia/refractory anemia

4、 with ringedsideroblasts,RA/RAS)(2/5例,40％)、伴多系病態(tài)造血的難治性血細(xì)胞減少癥(refractory cytopenia with multilineagedysplasia,RCMD)和伴環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞的RCMD(refractorycytopenia with multilineage dysplasia with ringed blasts,RCMD-RS)(8/21例,38.1％)、難治

5、性貧血伴有原始細(xì)胞增多-1型(refractory anemia with excess blasts-1,RAEB-1)(5/14例,35.7％)、難治性貧血伴原始細(xì)胞增多-2型(refractory anemia withexcess blasts-2,RAEB-2)(7/14例,50.O％)、單純5q-綜合征(1/3例,33.3％)、MDS-U(2/3例,66.7％)和難治性貧血伴有原始細(xì)胞增多轉(zhuǎn)化型/急性髓系白血病(RAEBt/

6、AML)(3/8例,37.5％)之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；GRAF基因甲基化頻率與患者的FAB分型、IPSS分組和WHO分型均無相關(guān)性(P>0.05)；Cox回歸分析揭示GRAF基因甲基化、年齡、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、IPSS分組對(duì)患者的生存具有顯著的影響(P值分別為0.017,0.001,0.001和<0.001),而性別、血紅蛋白含量、血小板計(jì)數(shù)并無影響(P>0.05)。甲基化陽性組與陰性組預(yù)計(jì)50％生存時(shí)間分別為12個(gè)月

7、和26個(gè)月,兩組之間有顯著差異(x2=7.942,P=0.005)。②132例AML患者中87例(65.9％)發(fā)生GRAF基因甲基化,GRAF基因甲基化改變與患者的性別、年齡、白細(xì)胞、血紅蛋白、血小板計(jì)數(shù)、染色體異常等結(jié)果均無相關(guān)性(P>0.05)；AML各亞型中GRAF基因甲基化頻率分別為63.0％(17/27例,M1)、57.1％(24/42例,M2)、72.2％(13/18例,M3)、84.0％(21/25例,M4)、46.2％(

8、6/13例,M5)、85.7％(6/7例,M6),AML各分型之間GRAF甲基化頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=11.143,P=0.049),在急性粒單核細(xì)胞白血病(M4)和急性紅白血病(M6)中甲基化頻率明顯高于其他亞型:AML患者中GRAF轉(zhuǎn)錄本水平(0.01％～169.75％,中位3.82％)較對(duì)照組(14.49％～126.85％,中位56.04％)顯著降低(P<0.05),其中甲基化陽性組GRAF轉(zhuǎn)錄本水平較甲基化陰性組顯著降低(

9、P=0.005),GRAF基因表達(dá)量與患者性別、年齡、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量、血小板計(jì)數(shù)、FAB亞型、染色體核型分組均無相關(guān)性(P＞0.05)。③61例CML患者中34例(55.7％)發(fā)生GRAF基因甲基化,GRAF基因甲基化改變與患者的年齡、性別、血紅蛋白含量、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、染色體異常類型等結(jié)果均無相關(guān)性(P＞0.05)；GRAF基因甲基化頻率在CML各分期分別為慢性期(CP)55.3％(21/38例)、加速期(AP