LRIG3對膠質母細胞瘤細胞系GL15生物學特性影響的分子生物學機制研究.pdf

1、第一部分
　　 目的：明確膠質母細胞瘤細胞系GL15的生物學特征并探討EGF對GL15細胞系生物學特征的影響。
　　 方法：在連續(xù)培養(yǎng)的過程中，觀察膠質母細胞瘤GL15細胞系的形態(tài)學表現(xiàn)和生長增殖特性。免疫細胞化學方法行GFAP、PCNA染色，流式細胞儀分析細胞周期，Transwell、MTT法檢測EGF對GL15細胞生物學特征的影響，并與U251MG和U373MG膠質母細胞瘤細胞系進行比較。
　　 結果：GL1

2、5細胞形態(tài)為典型的膠質母細胞瘤形態(tài)，鏡下可見很多有絲分裂核細胞，細胞器發(fā)達，生長增殖活躍，具有克隆形成和侵襲能力。GFAP和PCNA分別在胞漿和胞核呈陽性表達。EGF可雙向調節(jié)細胞增殖活性、侵襲性及GFAP蛋白表達。
　　 結論：GL15細胞系保持了膠質母細胞瘤的生物學特征，是研究膠質母細胞瘤很理想的細胞平臺。該細胞系的生物學特性與EGFR緊密相關。第二部分
　　 目的：探討表皮生長因子受體(EGFR)信號通路對人膠質母

3、細胞瘤GL15細胞系細胞生物學特性的影響。
　　 方法：甲基四唑蘭(MTT)和Transwell分別檢測表皮生長因子(EGF)，AG1478對GL15細胞增殖和侵襲力的影響，逆轉錄酶聚合酶鏈反應(RT-PCR)和Western blot分別檢測EGF和AG1478作用后GL15細胞膠質纖維酸性蛋白(GFAP)mRNA和蛋白表達。
　　 結果：外源性的EGF雙向調節(jié)GL15細胞增生和生長，小劑量(50ng/ml，100ng

4、/ml)EGF能促進細胞增生和提高細胞侵襲能力以及GFA/minRNA和蛋白表達，而大劑量(200ng/ml)則能降低其增殖和侵襲能力，AG1478則能明顯拮抗EGFR活性。
　　 結論：GL15膠質母細胞瘤細胞系的生物學特性與EGFR所在的7號染色體過度擴增密切相關。EGF可雙向調節(jié)GL15細胞系的生長，AG1478能不完全抑制EGFR的活性。EGFR是基因治療膠質母細胞瘤的理想靶點。
　　 第三部分
　　 目

5、的：探討LRIG3調控膠質母細胞瘤細胞系GL15生物學行為的分子機制。
　　 方法：用LRIG3-EGFP質粒轉染GL15細胞，流式細胞儀分析轉染后細胞周期的變化，MTT法和Transwell分析檢測EGF和AG1478對轉染后的細胞增殖和侵襲的影響，逆轉錄酶聚合酶鏈反應(RT-PCR)和Western blot分別檢測EGF作用于轉染后的GL15細胞EGFR和LRIG3蛋白表達的變化。
　　 結果：將質粒LRIG3-E