THP-1細胞中miRNA-223、miRNA-15a和miRNA-16膿毒癥相關靶基因驗證.pdf

1、目的:膿毒癥(Sepsis)是感染導致的全身炎癥反應綜合征，病情發(fā)展快、預后差、病死率高，是臨床面對的重要問題和研究熱點。通過生物信息學技術分析發(fā)現(xiàn):FOXO1和ACVR2A可能是在膿毒癥患者生存組和死亡組差異表達的miRNA-223、miRNA-15a和miRNA-16的靶基因。本課題選擇THP-1細胞系驗證上述推論，為后續(xù)信號通路研究奠定基礎。
　　方法:
　　(1)用LPS誘導THP-1細胞后，采用qRT-PCR檢測各

2、時間點(0h、12h、24h、48h、72h)三種miRNAs和(0h、24h、48h、72h)兩種靶基因mRNAs表達水平變化情況;
　　(2)將miRNAs模擬物、抑制物轉染THP-1細胞48h后，采用qRT-PCR檢測各轉染組相應miRNAs含量變化情況;
　　(3)采用qRT-PCR和WesternBlot分別檢測miRNAs模擬物、抑制物轉染THP-1細胞48h后FOXO1和ACVR2A的mRNAs和蛋白表達變化情

3、況。
　　結果:
　　(1) LPS誘導THP-1細胞后，miRNA-223/15a/16表達量均逐漸減少，在24h-48h達到最低點，72h時恢復至接近0h水平，三種miRNAs在12h、24h、48h的表達量與各自0h的表達量的差異均有統(tǒng)計學意義，miRNA-223在72h的表達量高于其0h的袁達量且差異有統(tǒng)計學意義，miRNA-15a和miRNA-16在72h的表達量與各自0h的表達量相比差異無統(tǒng)計學意義;靶基因FOX

4、O1和ACVR2A的mRNAs表達量則逐漸升高，在48h達到最高點后逐漸減少，兩種目的基因mRNAs相對含量在24h、48h、72h的相對表達量均高于各自0h的表達量，差異均有統(tǒng)計學意義。
　　(2)THP-1細胞按分組分別轉染miRNA-223/15a/16模擬物后，M-223/15a/16組與模擬物對照組相比相應的miRNA含量均明顯增加，差異均有統(tǒng)計學意義;M-223/15a/16組FOXO1的mRNA水平和編碼蛋白表達量均

5、明顯低于模擬物對照組，差異均有統(tǒng)計學意義;M-223/15a/16組ACVR2A的mRNA水平均低于模擬物對照組且差異有統(tǒng)計學意義，而ACVR2A編碼蛋白表達量與模擬物對照組比較均無明顯差異。
　　(3)按分組分別轉染miRNA-223/15a/16抑制物后，I-223/15a/16組與抑制物對照組相比相應的miRNA含量均明顯減少，差異均有統(tǒng)計學意義;I-223/15a/16組FOXO1的mRNA水平和編碼蛋白表達量均明顯高于抑