微直流電刺激對(duì)成骨細(xì)胞生物學(xué)性能影響的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過(guò)對(duì)體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞施加不同強(qiáng)度的直流電刺激,探討微量直流電對(duì)成骨細(xì)胞增殖和功能的影響,為口腔修復(fù)臨床應(yīng)用直流電促進(jìn)牙槽骨生長(zhǎng)提供體外細(xì)胞學(xué)依據(jù)。
　　 方法:自行設(shè)計(jì)研制體外成骨細(xì)胞直流電刺激裝置:將電源、滑動(dòng)變阻器、開(kāi)關(guān)、六孔培養(yǎng)板固定在一塊300mm×200mm的有機(jī)玻璃板上,并把電路串聯(lián)起來(lái),在六孔培養(yǎng)板每孔所對(duì)應(yīng)的板蓋上打兩個(gè)小孔,將鎳鈦弓絲一端與電路連接,另一端穿過(guò)培養(yǎng)板蓋浸入培養(yǎng)液內(nèi),將電路接通,于通電后

2、10min,30min,50min時(shí)用萬(wàn)用表測(cè)定電路中電流的強(qiáng)度,經(jīng)檢測(cè)電流穩(wěn)定,絕對(duì)誤差在3μA內(nèi)。通過(guò)組織塊法原代分離培養(yǎng)新生Sprague-Dawley大鼠顱頂骨的成骨細(xì)胞,傳代培養(yǎng)至第三代進(jìn)行堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)染色鑒定。純化后擴(kuò)增成骨細(xì)胞,傳代培養(yǎng)至第四代或第五代備用。實(shí)驗(yàn)第一部分,將細(xì)胞按1.0×105個(gè)／孔的濃度接種于六孔培養(yǎng)板中,每板接種四孔,每孔2ml。實(shí)驗(yàn)分為三組,微電流對(duì)三組

3、細(xì)胞刺激的強(qiáng)度分別為0μA、20μA和100μA,每天刺激三次,于微電流刺激的第1天,第3天,第5天,第7天時(shí)分別收集三組細(xì)胞,用MTT法測(cè)定三組成骨細(xì)胞的數(shù)量,之后重復(fù)該實(shí)驗(yàn)兩次,用Spss16.0軟件將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并繪制細(xì)胞增殖曲線；實(shí)驗(yàn)第二部分,細(xì)胞分組及接種的方法同第一部分,之后于微直流電刺激的第1天,第3天,第5天,第7天時(shí)收集三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的成骨細(xì)胞測(cè)定其ALP活性,重復(fù)該實(shí)驗(yàn)兩次,將實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用Spss16.0軟件

4、進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并繪制成骨細(xì)胞ALP活性直方圖。
　　 結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)自行研制的成骨細(xì)胞直流電刺激裝置通電過(guò)程中電流穩(wěn)定,絕對(duì)誤差在3μA內(nèi)；經(jīng)強(qiáng)度為20μA和100μA的直流電刺激后的細(xì)胞其增殖和對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,三組細(xì)胞均在第3～5天時(shí)增殖速度最快,第5～7天時(shí)增殖速度減慢；經(jīng)強(qiáng)度為20μA和100μA的直流電刺激后的成骨細(xì)胞和對(duì)照組成骨細(xì)胞的ALP活性均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；強(qiáng)度為20μA的直流電刺激組與強(qiáng)度為100μA的直流電刺激

5、組比較,成骨細(xì)胞ALP活性也有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01),且直流電強(qiáng)度為20μA的刺激組成骨細(xì)胞ALP活性增加較明顯。
　　 結(jié)論:直流電強(qiáng)度為20μA和100μA時(shí)對(duì)細(xì)胞的增殖無(wú)促進(jìn)作用,但可以增加成骨細(xì)胞的ALP活性,且經(jīng)20μA的直流電刺激的成骨細(xì)胞ALP活性明顯優(yōu)于經(jīng)100μA直流電刺激的成骨細(xì)胞,證明微量直流電可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的活性,特別是直流電強(qiáng)度為20μA時(shí)對(duì)成骨細(xì)胞活性的促進(jìn)作用更為顯著,這為微量直流電用于口腔修