人胎盤組織中間充質(zhì)干細(xì)胞的定位及其生物學(xué)特性.pdf

1、目的：從胎盤組織中分離培養(yǎng)獲得間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells， MSCs)已成為干細(xì)胞研究領(lǐng)域的一大熱點(diǎn)。MSCs在胎盤的分布并不均衡，如何取材直接影響到胎盤問充質(zhì)干細(xì)胞(placenta derived mesenchymal stem cells，PMSCs)在體外的有效獲取及擴(kuò)增。目前尚無特異性的標(biāo)記物可用于成體MSCs的識別。本實(shí)驗(yàn)旨在利用一些通用的MSCs標(biāo)記物，探索MSCs在人胎盤的分布規(guī)律，并在

2、此基礎(chǔ)上通過分組分離培養(yǎng)．PMSCs，觀察細(xì)胞生物學(xué)的特性，初步驗(yàn)證其規(guī)律，為MSCs的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用奠定良好的基礎(chǔ)。 方法：取無指征剖宮產(chǎn)之足月健康產(chǎn)婦的新鮮胎盤組織，按中央帶(A)、中間帶(B)和邊緣帶(C)、絨毛板層(a)、中間層(b)和基底板層(c) 分為九組：Aa、Ab、Ae、Ba、Bb、Be、Ca、Cb、Cc，連續(xù)切片，以CDl66、CD44、CD29分別做免疫熒光和免疫組化染色。顯微鏡下觀察陽性細(xì)胞分布區(qū)域，采

3、用HPIAS-1000彩色病理圖象分析系統(tǒng)進(jìn)行圖象分析，檢測陽性細(xì)胞區(qū)域的光密度值(OD)，以平均光密度值作為衡量表達(dá)強(qiáng)弱的標(biāo)準(zhǔn)。所測數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進(jìn)行分析。再按上述分組取材分離培養(yǎng)PMSCs，觀察各組細(xì)胞增殖情況有無差異，進(jìn)一步驗(yàn)證上述標(biāo)記物定位的可靠性；同時檢測所培養(yǎng)細(xì)胞的表面抗原，誘導(dǎo)傳代后的細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化，證實(shí)其具有MSCs的特點(diǎn)。 結(jié)果：(1)首次證實(shí)3個標(biāo)記物CDl66、CD44、CD29陽性表達(dá)細(xì)胞的

4、分布情況較一致，主要集中于血管內(nèi)皮下及血管附近間質(zhì)內(nèi)，胎盤中央帶中間層(Ab)陽性細(xì)胞較集中，陽性表達(dá)的強(qiáng)度較強(qiáng)，其OD值與其它組相比差異有顯著性(P＜0．05)，邊緣帶陽性細(xì)胞稀少，陽性表達(dá)的強(qiáng)度較弱；(2)分組分離培養(yǎng)PMSCs結(jié)果顯示：在相同處理方法下和相同條件培養(yǎng)基中，各組間細(xì)胞增殖情況有差異，其中Ab組生長速率和細(xì)胞數(shù)量的增加較其它組顯著；(3)流式細(xì)胞儀檢測表面抗原表明，培養(yǎng)所獲細(xì)胞表達(dá)CDl66、CD44、CD29、CDl