低氧對人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞向類髓核細(xì)胞誘導(dǎo)分化的生物學(xué)作用.pdf

1、目的：體外分離培養(yǎng)人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞(PMSCs)并觀察其生物學(xué)特性；比較不同氧濃度對PMSCs向類髓核細(xì)胞誘導(dǎo)分化的生物學(xué)影響。
　　 方法：
　　 第一部分：人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定
　　 采用酶消化加貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)人PMSCs，流式細(xì)胞儀器(FCM)鑒定PMSCs表面標(biāo)志，經(jīng)成骨、成脂肪誘導(dǎo)鑒定其分化能力。
　　 第二部分：低氧對人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞向類髓核細(xì)胞誘導(dǎo)分化的生物學(xué)作用

2、>　　 在不同氧濃度下(5％，21％)，用含有轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)的培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)PMSCs，CCK-8法比較1 d，3 d，5 d，7 d不同氧濃度下分化細(xì)胞的增殖情況；3 d，7 d時實時熒光PCR法檢測HIF-1α，Sox-9，CollagenⅡ和Aggrecan基因的相對表達(dá)，比較不同氧濃度對PMSCs向類髓核細(xì)胞定向分化的影響；誘導(dǎo)培養(yǎng)2周后，行免疫熒光檢測Ⅱ型膠原在分化細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 結(jié)果：①P

3、MSCs體外分離培養(yǎng)，其增殖迅速，短時間內(nèi)可大量擴增達(dá)到組織工程需要的種子細(xì)胞數(shù)量要求；FCM檢測PMSCs的表面抗原CD73、CD29、CD44、CD105均有不同程度表達(dá)，CD34、CD45和HLA-DR低表達(dá)或不表達(dá)，且細(xì)胞保持未分化狀態(tài)；經(jīng)誘導(dǎo)后可向成骨和成脂細(xì)胞方向分化。②通過CCK-8法對細(xì)胞增殖檢測發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)的第1d，不同氧濃度下兩組細(xì)胞都處于生長潛伏期，增殖速度無明顯差異(p>0.05)；第3 d起兩組細(xì)胞增殖明顯，且低氧

4、組明顯高于常氧組(p<0.05)；第5 d增殖達(dá)到高峰，同樣低氧組明顯高于常氧組(p<0.05)；第7 d，兩組細(xì)胞增殖下降，增殖速度無明顯差異(p>0.05)，顯示低氧對PMSCs誘導(dǎo)早期的增殖是有促進(jìn)作用的。③實時熒光PCR顯示PMSCs誘導(dǎo)培養(yǎng)3d時誘導(dǎo)組較對照組Sox-9基因表達(dá)有明顯差異(p<0.05)，且低氧組高于常氧組(p<0.05)，CollagenⅡ和Aggrecan基因較對照組無明顯差異(p>0.05)；7 d后So

5、x-9，CollagenⅡ和Aggrecan基因相對表達(dá)量在常氧組和低氧組都較非誘導(dǎo)組有顯著增加(p<0.05)，且低氧組高于常氧組(p<0.05)，同時，低氧條件下，各時間點HIF-1α的相對表達(dá)量較常氧組有明顯增加(P<0.05)，結(jié)果說明，髓核誘導(dǎo)劑能夠誘導(dǎo)PMSCs表達(dá)Sox-9，CollegenⅡ、Aggrecan基因，低氧通過HIF-1α進(jìn)一步加強了這一誘導(dǎo)效應(yīng)。④誘導(dǎo)培養(yǎng)2周后，行Ⅱ型膠原免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)兩組細(xì)胞均表達(dá)Ⅱ型