孔雀石綠替代藥物的篩選及其對(duì)水霉病的防治效果研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)論文共分為四個(gè)部分。第一部分：魚(yú)類水霉病人工感染方法的建立；第二部分：藥物篩選；第三部分：初篩目標(biāo)藥物的臨床藥效及安全性評(píng)價(jià)、第四部分：初篩目標(biāo)藥物復(fù)配制劑的臨床藥效及安全性評(píng)價(jià)。具體內(nèi)容如下： 第一部分：實(shí)驗(yàn)選擇對(duì)魚(yú)體肌肉刮傷、養(yǎng)殖水溫度劇變、水霉菌株浸泡魚(yú)體三個(gè)條件對(duì)草魚(yú)、鯽進(jìn)行水霉病人工感染。通過(guò)根據(jù)不同條件分組的感染結(jié)果分析確定影響水霉病人工感染的條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示選擇上述任何單一條件都無(wú)法對(duì)草魚(yú)、鯽成功進(jìn)行感染，

2、而選擇魚(yú)體肌肉刮傷、養(yǎng)殖水溫度劇變、水霉菌株浸泡魚(yú)體三個(gè)條件同時(shí)實(shí)施則取得了非常好的效果，該實(shí)驗(yàn)組的草魚(yú)、鯽24h內(nèi)即可被成功感染，且感染率為100％±0，實(shí)驗(yàn)表明受傷是感染水霉病的一個(gè)必要條件，而溫度變化是感染水霉病的一個(gè)重要影響條件。進(jìn)而對(duì)該方法做三次重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，每次設(shè)三個(gè)平行對(duì)照缸，進(jìn)行可靠性評(píng)價(jià)，F(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果顯示該方法下對(duì)草魚(yú)、鯽人工感染，各重復(fù)次數(shù)間差異不顯著(P>0.05)，該方法具有良好的重現(xiàn)性、可靠性好，成功建立了魚(yú)類水霉

3、病的人工感染方法。該方法的建立為抗水霉藥物的篩選和藥物臨床藥效實(shí)驗(yàn)提供了可靠的病理模型來(lái)源，同時(shí)也為水霉病發(fā)生、發(fā)展規(guī)律的研究提供理論依據(jù)。 第二部分：以藥物對(duì)水霉的體外作用效果為篩選模型，對(duì)待篩選藥物庫(kù)的藥物進(jìn)行體外初步篩選。由于篩選藥物藥物數(shù)量較大，僅以初篩目標(biāo)化合物BYK-1為例進(jìn)行方法說(shuō)明。通過(guò)該模型，篩選出包括初篩目標(biāo)化合物BYK-1在內(nèi)的幾種對(duì)水霉體外作用效果較好的初篩目標(biāo)化合物。初篩目標(biāo)化合物BYK-1對(duì)水霉孢子三

4、個(gè)菌量的MIC均為3mg/L。對(duì)水霉菌絲的三個(gè)菌量在8mg/L濃度下作用1h即有殺滅作用，且隨著濃度的升高，有效殺滅時(shí)間也隨之降低。 第三部分：對(duì)初篩目標(biāo)化合物BYK．1進(jìn)行復(fù)篩，復(fù)篩內(nèi)容包括實(shí)驗(yàn)室臨床藥效、安全性評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)顯示初篩目標(biāo)化合物BYK-1對(duì)水霉病的預(yù)防有很好的保護(hù)率，其中潑灑方式在藥物濃度為3mg/L時(shí)對(duì)草魚(yú)、鯽的保護(hù)率分別可達(dá)到90％、96.7％；浸泡方式在濃度為16mg/L時(shí)對(duì)草魚(yú)、鯽的保護(hù)率分別為83.3％、

5、80％；在治療方面實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，浸泡用藥方式效果遠(yuǎn)好于潑灑方式，潑灑方式在3mg/L 濃度時(shí)對(duì)草魚(yú)、鯽的保護(hù)率僅有6.67％和13.3％，而浸泡方式對(duì)草魚(yú)和鯽的保護(hù)率均為43.3％。安全性實(shí)驗(yàn)(急性毒性實(shí)驗(yàn))結(jié)果顯示在水溫20℃時(shí)，初篩目標(biāo)化合物BYE-1對(duì)草魚(yú)、鯽的半數(shù)致死濃度LD50 分別為15.73、16.90mg/L，相應(yīng)的安全濃度則分別為1.573、1.690。 第四部分：擬通過(guò)藥物復(fù)配，利用藥物間的協(xié)同作用，達(dá)到提高

6、藥效、降低毒性的作用。體外藥效實(shí)驗(yàn)表明初篩目標(biāo)化合物BYK-1與F-1按1：3比例復(fù)配效果最佳。臨床藥效實(shí)驗(yàn)顯示：在預(yù)防方面：潑灑方式用藥，單獨(dú)使用初篩目標(biāo)化合物BYK-1在3mg幾濃度下對(duì)草魚(yú)、鯽的保護(hù)率分別為90％、96.7％，而復(fù)配后在0.8mg/L濃度下分別達(dá)到96.7％、100％。浸泡方式用藥，單獨(dú)使用初篩目標(biāo)化合物BYK-1在16mg/L時(shí)對(duì)草魚(yú)、鯽的保護(hù)率分別為83.3％、80％，而復(fù)配后8mg/L濃度時(shí)對(duì)草魚(yú)、鯽水霉病的

7、保護(hù)率達(dá)到93.3％、100％；從治療方面來(lái)看，潑灑用藥方式下單獨(dú)使用初篩目標(biāo)化合物BYK-1在濃度3mg幾濃度時(shí)對(duì)草魚(yú)、鯽的保護(hù)率僅有6.67％和13.3％，而復(fù)配后1.5mg/L濃度時(shí)對(duì)草魚(yú)、鯽的保護(hù)率36.7％和40％。浸泡用藥方式下16mg/L時(shí)對(duì)草魚(yú)和鯽的保護(hù)率為50％、53.3％。對(duì)草魚(yú)、鯽的半數(shù)致死濃度LD50 分別由復(fù)配前的15.73、16.90mg/L提高到18.36、20.45mg/L，相應(yīng)的安全濃度也由復(fù)配前的1.