紫杉醇長效緩釋注射微球的研究.pdf

1、紫杉醇是一種從太平洋紅豆杉樹樹皮中提取的有效抗腫瘤藥。臨床研究已經(jīng)證實了紫杉醇在抗多種實體腫瘤，包括乳腺癌、晚期卵巢癌、肺癌、腦部和頸部腫瘤以及急性白血病方面，都有重要而顯著的作用。近年來也有報道認(rèn)為，紫杉醇對于非激素依賴的前列腺癌也有良好的療效。由于紫杉醇在水中以及許多藥用溶劑中的低溶解性，目前市售紫杉醇注射劑均是以聚氧乙烯蓖麻油(CremophorEL)為溶劑，該溶劑副作用大，易引起嚴(yán)重的過敏反應(yīng)。同時，紫杉醇作為一種細(xì)胞周期特異性

2、的藥物，體內(nèi)低劑量持續(xù)給藥較一次性沖擊給藥的抑瘤效果更理想。因此，為了解決以上問題，許多研究者將紫杉醇制備成不同緩釋劑型，如脂質(zhì)體、微乳、微球、納米粒等。這些劑型不但可以有效避免Cremophor EL的毒性，降低紫杉醇的自身毒性，還可以延長藥物在體內(nèi)的作用時間。目前，在眾多紫杉醇微球的研究中，對于紫杉醇微球皮下給藥并進(jìn)行系統(tǒng)研究的文獻(xiàn)未見報道，因此本研究擬對紫杉醇長效緩釋注射微球的處方工藝，以及皮下給藥的藥效學(xué)、藥動學(xué)進(jìn)行系統(tǒng)的研究和

3、評價。 微球制劑作為能夠緩釋藥物的劑型已經(jīng)被廣泛研究。這種劑型通過其特殊骨架材料——PLGA的降解溶蝕達(dá)到緩釋藥物的目的。同時由于該骨架材料可生物降解為水和CO<,2>，對人體無毒無害，已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)為藥用輔料。因此將具有良好抗瘤活性的紫杉醇制備成長效緩釋注射微球用于腫瘤治療，可以有效降低藥物毒性、延長藥物作用時間，同時具有顯效快、作用強(qiáng)、給藥方便等特點。本論文以不同分子量和不同乳酸/羥基乙酸(LA/GA)比例的PLGA作為載

4、體，研究制備了紫杉醇長效緩釋注射微球。研究內(nèi)容主要包括紫杉醇微球的處方和制備工藝研究、體外釋藥方法的研究、制劑穩(wěn)定性研究、微球的體外釋藥機(jī)理研究、體內(nèi)藥效學(xué)評價、體內(nèi)過程研究以及血液毒性和生物相容性的研究。 1、紫杉醇長效緩釋注射微球的處方設(shè)計和工藝研究 采用改良的單乳溶劑蒸發(fā)法制備了紫杉醇微球。以微球形態(tài)、粒徑及其分布、微球載藥量以及包封率、體外釋藥曲線等作為微球的質(zhì)量評價指標(biāo)，通過單因素考察(包括PLGA分子量、PL

5、GA的濃度、LA/GA不同比例、攪拌速度等)和正交實驗，對處方和工藝進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明所制得的微球表面光滑圓整，粒徑均勻，平均粒徑小于5μm，包封率大于80％，體外可持續(xù)釋藥20～30d。 2、紫杉醇長效緩釋注射微球體外釋藥評價方法的建立與制劑穩(wěn)定性研究 本章主要對紫杉醇微球的體外釋藥條件進(jìn)行了考察，包括不同的釋放介質(zhì)、不同釋放容器、抑菌劑的影響等。同時建立了加速釋藥方法以縮短評價周期，對長期試驗和短期試驗的釋放度數(shù)據(jù)進(jìn)

6、行點點對應(yīng)的相關(guān)性擬合，結(jié)果表明二者相關(guān)性較好，可用體外短期加速釋放實驗預(yù)測長期釋藥的釋放度數(shù)據(jù)。 通過對紫杉醇微球的外觀形態(tài)、藥物含量、體外釋放行為的考察，表明制備的紫杉醇長效緩釋注射微球在高溫、高濕及光照條件下各方面性質(zhì)均不穩(wěn)定，保存時應(yīng)注意避光、低溫、干燥。<'60>Co輻射滅菌對于該微球制劑無明顯影響。 3、紫杉醇長效緩釋注射微球釋藥機(jī)理的研究 通過失重法和對聚合物分子量的GPC檢測，評價了PLGA微球的

7、體外降解行為。結(jié)果顯示聚合物在體外釋放30天的時間里，分子量的分布范圍雖然增大，但變化不明顯。說明紫杉醇緩釋微球的釋藥過程并非主要依靠聚合物的降解。通過測定不同時間點微球在釋放介質(zhì)中的粒徑變化評價微球的溶脹程度。采用Higuchi、零級、一級方程和Ritger-Peppas指數(shù)模型對釋藥曲線進(jìn)行擬合，結(jié)果表明紫杉醇長效緩釋注射微球的釋藥曲線符合Higuchi方程。方程擬合結(jié)果與GPC結(jié)果皆說明在微球釋藥過程中，藥物的自身擴(kuò)散起到了較為重

8、要的作用。 4、紫杉醇長效緩釋注射微球體內(nèi)藥效學(xué)研究 本章以MTT法評價了紫杉醇長效緩釋注射微球?qū)DA-MB-435乳腺癌細(xì)胞的體外抑瘤活性；以小鼠體內(nèi)S-180腫瘤和裸鼠體內(nèi)的PC-3m腫瘤為研究對象，分別探討了紫杉醇微球?qū)υ隗w腫瘤的抑制效果。結(jié)果表明紫杉醇微球的體外抑瘤活性高于紫杉醇注射液，同時呈現(xiàn)劑量依賴性；在瘤旁皮下給藥對S-180腫瘤的抑瘤效果最佳，相同給藥劑量時微球組對腫瘤的抑制率高于紫杉醇注射液，而微球?qū)?/p>

9、腫瘤的抑制效果也具有劑量依賴的特性；對于裸鼠體內(nèi)PC-3m腫瘤，紫杉醇微球也表現(xiàn)了良好的抑瘤活性，尤其在相同給藥劑量和給藥途徑的情況下，微球組的腫瘤生長曲線最為緩慢，抑瘤率也最高。 5、紫杉醇長效緩釋注射微球注射劑體內(nèi)過程的研究與評價 以大鼠作為模型動物，對紫杉醇長效緩釋注射微球的體內(nèi)過程進(jìn)行了初步研究。大鼠皮下注射微球后的藥代動力學(xué)結(jié)果表明，紫杉醇微球在給藥后的28d內(nèi)緩慢釋放藥物，Cmax為68.63ng/ml，Tm

10、ax為3.28d，MRT為17.32d，藥代動力學(xué)過程符合二室模型一級吸收，其絕對生物利用度達(dá)到97.85％。體內(nèi)殘留藥量與體外微球釋放曲線進(jìn)行擬合，結(jié)果顯示體內(nèi)外釋放具有較好的相關(guān)性。 6、紫杉醇長效緩釋注射微球皮下注射的初步安全性評價 以小鼠為模型，白細(xì)胞數(shù)量為指標(biāo)，評價了紫杉醇微球?qū)τ谛∈笱旱亩拘?；同時對不同時間點的小鼠皮膚進(jìn)行病理切片觀察，評價紫杉醇微球的皮下注射對于局部組織的損傷程度。結(jié)果表明微球注射給藥后，