青蒿琥酯對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎防治作用的研究.pdf

1、目的:觀察青蒿琥酯(Ast)對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)的防治作用并探討其作用機(jī)制。
　　方法:將50只Wistar雌性大鼠隨機(jī)分成5組:正常對(duì)照組、EAE對(duì)照組及Ast大劑量、中劑量、小劑量組。用新鮮豚鼠脊髓勻漿(GPSCH)與含卡介苗(BCG)的完全福氏佐劑(CFA)建立EAE模型。自造模當(dāng)日起連續(xù)10天，大、中、小劑量Ast組分別給予Ast20mg/(kg.d)、10mg/(kg.d)、5mg/(kg.d)進(jìn)行干預(yù)。

2、于EAE大鼠發(fā)病高峰期（大鼠神經(jīng)功能障礙評(píng)分連續(xù)三天無(wú)增加或大鼠處于瀕死狀態(tài)、對(duì)外界刺激無(wú)反應(yīng)或死亡）終止實(shí)驗(yàn)，已經(jīng)注入免疫抗原進(jìn)行EAE造模處理而未發(fā)病大鼠及正常對(duì)照組大鼠分別均于觀察1個(gè)月后處死。對(duì)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能障礙評(píng)分，于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)切片蘇木素-伊紅（HE）染色后行病理觀察并根據(jù)Okuda等的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，予免疫組織化學(xué)檢測(cè)腦組織中前列腺素E2(PGE2)及酪氨酸蛋白激酶A4(EphA4)、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(

3、PARP-1)的表達(dá)情況，用ImagePro Plus軟件對(duì)PGE2、EphA4、PARP-1的表達(dá)進(jìn)行平均光密度值(OD值)測(cè)定，予放射免疫法和雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)分別測(cè)定腦組織中TNF-α及IL-17含量，并采用放射免疫法測(cè)定血清中IL-2、IL-4含量，使用spss17.0軟件對(duì)所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:(1)臨床情況:①正常對(duì)照組大鼠未發(fā)病。與EAE對(duì)照組相比，Ast各劑量組EAE發(fā)病率均下

4、降(P＜0.05)，但Ast大、中劑量組間發(fā)病率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。②與EAE對(duì)照組相比，Ast各劑量組EAE發(fā)病潛伏期均延長(zhǎng)(P＜0.05)，以大劑量組潛伏期延長(zhǎng)最明顯。③與EAE對(duì)照組相比，Ast各劑量組EAE疾病進(jìn)展期均縮短，且隨Ast劑量增加，進(jìn)展期越短，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。④與EAE對(duì)照組相比，Ast各劑量組神經(jīng)功能障礙評(píng)分均降低，以Ast大劑量組最為明顯，且各組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0

5、.05)。(2) HE染色病理學(xué)觀察情況:正常對(duì)照組大鼠腦組織內(nèi)未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。EAE對(duì)照組及Ast各劑量組腦組織小血管周圍均可見不同程度炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，典型者大量淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞聚集于血管周圍呈袖套樣改變。按Okuda等的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，與EAE對(duì)照組相比，Ast各劑量組評(píng)分均有下降(P＜0.05)，且隨Ast劑量增加EAE大鼠腦組織病理學(xué)評(píng)分依次降低，各劑量組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3) EAE對(duì)照組及Ast組免疫組

6、織化學(xué)結(jié)果:①與正常對(duì)照組相比，EAE對(duì)照組及Ast各劑量組PGE2含量均明顯升高(P＜0.05)。與EAE對(duì)照組相比，Ast各劑量組PGE2含量均減少(P＜0.05)，且隨Ast劑量的增加PGE2含量依次下降，各劑量組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。②正常對(duì)照組未見EphA4的表達(dá)，EAE對(duì)照組與Ast各劑量組均可見EphA4表達(dá)，尤以EAE對(duì)照組明顯。與EAE對(duì)照組相比，Ast各劑量組EphA4表達(dá)均減少，且隨Ast劑量增加E

7、phA4表達(dá)呈下降趨勢(shì)，各劑量組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。③與正常對(duì)照組相比，EAE對(duì)照組PARP-1表達(dá)減少，而Ast各劑量組PARP-1表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)。與EAE對(duì)照組相比，Ast各劑量組PARP-1表達(dá)均增多(P＜0.05)，以大劑量組增多最明顯，且Ast各劑量組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(4) EAE對(duì)照組及Ast各劑量組腦組織內(nèi)TNF-α及IL-17含量變化:①EAE對(duì)照組及Ast各劑量組腦組織內(nèi)

8、TNF-α含量較正常對(duì)照組均增加，但Ast大劑量組與正常對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。與EAE對(duì)照組相比，Ast各劑量組TNF-α含量均減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且隨Ast劑量增加，大鼠腦組織TNF-α含量減少越明顯(P＜0.05)。②與正常對(duì)照組相比，EAE對(duì)照組和Ast各劑量組IL-17含量均明顯升高(P＜0.05)。與EAE對(duì)照組相比，Ast各劑量組IL-17含量均下降，且隨Ast劑量的增加IL-17含量

9、下降越明顯，各組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(5) EAE對(duì)照組及Ast各劑量組血清中IL-2、IL-4含量變化:①與正常對(duì)照組相比，EAE對(duì)照組及Ast各劑量組血清中IL-2含量均升高(P＜0.05)。與EAE對(duì)照組比較，Ast各劑量組IL-2含量均減低(P＜0.05)。隨Ast劑量的增加Ast各劑量組IL-2含量依次下降，但大、中劑量組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。②Ast各劑量組IL-4含量較正常對(duì)照組升高，而E

10、AE對(duì)照組IL-4含量較正常對(duì)照組下降，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與EAE對(duì)照組比較，Ast各劑量組IL-4含量均升高(P＜0.05)，且隨Ast劑量的增加Ast各劑量組IL-4含量依次上升，各組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(6)相關(guān)性分析:①EAE對(duì)照組及Ast各劑量組發(fā)病潛伏期與大鼠腦組織內(nèi)PGE2、EphA4、TNF-a和IL-17含量及血清中IL-2含量呈負(fù)相關(guān)（P＜0.01或P＜0.05），與腦組織PAR

11、P-1表達(dá)水平和血清中IL-4含量呈正相關(guān)(P＜0.05)。②EAE對(duì)照組及Ast各劑量組發(fā)病進(jìn)展期與大鼠腦組織內(nèi)PGE2、EphA4、TNF-a和IL-17含量及血清中IL-2含量呈正相關(guān)（P＜0.01或P＜0.05），與腦組織PARP-1表達(dá)水平和血清中IL-4含量呈負(fù)相關(guān)（P＜0.01或P＜0.05）。③EAE對(duì)照組及Ast各劑量組發(fā)病高峰期大鼠神經(jīng)功能障礙評(píng)分與大鼠腦組織內(nèi)PGE2、EphA4、TNF-a和IL-17含量及血清中

12、IL-2含量呈正相關(guān)（P＜0.01或P＜0.05），與腦組織PARP-1表達(dá)水平和血清中IL-4含量呈負(fù)相關(guān)(P＜0.01或P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.PGE2及EphA4在EAE大鼠發(fā)病過(guò)程中含量均升高，PARP-1含量下降，PGE2、EphA4和PARP-1含量均與發(fā)病潛伏期、進(jìn)展期以及發(fā)病高峰期大鼠神經(jīng)功能障礙評(píng)分密切相關(guān)，提示PGE2、EphA4及PARP-1在EAE疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。2.TNF-a、I

13、L-17及IL-2在EAE大鼠發(fā)病過(guò)程中含量均上升，IL-4含量下降，TNF-a、IL-17、IL-2和IL-4含量均與發(fā)病潛伏期、進(jìn)展期及發(fā)病高峰期大鼠神經(jīng)功能障礙評(píng)分密切相關(guān)，提示TNF-a、IL-17、IL-2及IL-4在EAE疾病的病情衍變過(guò)程中具有重要作用。3.不同劑量組Ast均可不同程度降低EAE大鼠的發(fā)病率，延長(zhǎng)發(fā)病潛伏期，縮短疾病進(jìn)展期，降低疾病高峰期神經(jīng)功能障礙評(píng)分，改善EAE大鼠腦組織病理學(xué)改變，提示Ast對(duì)EAE大