永生化人前軟骨干細胞株的生物學(xué)特性.pdf

1、目的：研究猿腎病毒40大T抗原基因永生化人前軟骨干細胞(IPSC)的生物學(xué)特性，探討其在骨軟骨瘤發(fā)生、增殖和轉(zhuǎn)移中的作用，從腫瘤干細胞的角度探討遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤的發(fā)生機制。
　　 方法：取人流產(chǎn)胎兒前軟骨干細胞(PSC)，利用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將含有SV40Tag的質(zhì)粒pCMVSV40T/PUR轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的人前軟骨干細胞，經(jīng)嘌呤霉素篩選，陽性克隆擴大培養(yǎng)，觀察細胞的形態(tài)學(xué)，以及傳代復(fù)蘇的情況，繪制細胞生長曲線。用免疫

2、熒光細胞化學(xué)技術(shù)檢測IPSC中FGFR-3，用RT-PCR檢測IPSC中V40Tag和FGFR-3的表達。
　　 結(jié)果：培養(yǎng)后的永生化人前軟骨干細胞(IPSC)，形態(tài)與前軟骨干細胞(PSC)大體一致，傳代、凍存、復(fù)蘇對IPSC的存活率無影響,而第六代和第十代PSC的存活率降低(P<0.01)。與第六代和第十代PSC相比，IPSC增殖較旺盛，群體倍增時間短、增殖率較高(P<0.01)。免疫熒光結(jié)果顯示IPSC的FGFR-3表達陽性