鱉甲防治肝纖維化及其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、肝硬化是嚴(yán)重危害人類身心健康的常見(jiàn)病、多發(fā)病。肝纖維化是慢性肝病發(fā)展至肝硬化的必經(jīng)途徑，是各種慢性肝病的共同病理學(xué)基礎(chǔ)，是由各種損肝因素(炎癥、中毒、慢性淤膽、代謝障礙、血液循環(huán)障礙、營(yíng)養(yǎng)障礙等)誘發(fā)的肝細(xì)胞變性壞死-炎癥反應(yīng)-纖維結(jié)締組織增生這一反復(fù)發(fā)作的病理修復(fù)反應(yīng)。其病理學(xué)特征為匯管區(qū)纖維結(jié)締組織增多，形成細(xì)小的條索和菲薄的間隔，并向肝小葉內(nèi)延伸，但尚未形成假小葉和再生結(jié)節(jié)。肝纖維化具有可逆性。 若病因持續(xù)存在，肝纖維化逐

2、漸加重，引起肝小葉及血管等改建，假小葉和結(jié)節(jié)形成，即發(fā)展為肝硬化，病變將難逆轉(zhuǎn)，且對(duì)肝臟造成諸多不良影響，如纖維隔中所存在的血管直接將肝動(dòng)脈及門(mén)靜脈的血流分流出肝臟，減少與肝實(shí)質(zhì)接觸；膠原纖維沉著導(dǎo)致肝竇毛細(xì)血管化，阻礙血流與肝細(xì)胞接觸；肝動(dòng)脈與門(mén)靜脈交通支開(kāi)放，以及小葉中心纖維化阻礙血流進(jìn)入肝靜脈，而加劇門(mén)脈高壓。臨床見(jiàn)有營(yíng)養(yǎng)障礙、門(mén)脈高壓、脾亢、腹水等。 因此，采取適當(dāng)措施，將病變終止于肝纖維化階段甚至逆轉(zhuǎn)至正常，是治療慢性

3、肝病和預(yù)防肝硬化、肝癌的關(guān)鍵。 鱉甲作為防治肝纖維化的常用中藥，備受人們關(guān)注。關(guān)于鱉甲防治肝纖維化的劑型，歷來(lái)存在兩種觀點(diǎn)，研末吞服、入丸散抑或入湯劑久煎，莫衷一是。本研究通過(guò)鱉甲提取物對(duì)肝星狀細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)，以及鱉甲不同劑型體外和在體實(shí)驗(yàn)，闡明其抗肝纖維化的作用及可能機(jī)制。 1.體外實(shí)驗(yàn)鱉甲對(duì)肝星狀細(xì)胞的影響 1.1 鱉甲提取物及鱉甲不同劑型對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖的影響 目的:探討鱉甲不同劑型對(duì)肝星狀細(xì)胞 (

4、HSC)增殖的影響作用，以及鱉甲對(duì)HSC增殖影響的物質(zhì)基礎(chǔ)。 方法:傳代培養(yǎng)的大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6與鱉甲不同劑型(散劑、湯劑)含藥血清以及鱉甲提取物(蛋白質(zhì)類物質(zhì)、分子量大于和小于6000的物質(zhì))共同培養(yǎng)48h、72h后，采用MTT比色法測(cè)定各濃度組HSC增殖情況。 結(jié)論:分析鱉甲成分，鑒于甲殼素、殼聚糖是由β一葡萄糖借β-1，4糖苷鍵組成的高分子多糖類纖維素，不溶于水，人體消化液不含水解β-1，4糖苷鍵的纖維素

5、酶，所以不被消化利用。推測(cè)鱉甲經(jīng)煎煮后，起負(fù)抑制效應(yīng)的大分子蛋白變性成為小分子肽類物質(zhì)而發(fā)揮抑制HSC增殖的作用。 1.2 鱉甲提取物對(duì)肝星狀細(xì)胞活化及膠原合成的影響 目的:探討鱉甲提取物是否抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β<,1>(TGF-β<,1>)刺激的人肝星狀細(xì)胞系(LX-1 細(xì)胞)Ⅰ型膠原(collagen TypeⅠ，colⅠ，C-Ⅰ)、Ⅲ型膠原(collagen Type Ⅲ，col Ⅲ，C-Ⅲ)等蛋白表達(dá)，以及能否經(jīng)

6、過(guò)調(diào)控α-肌動(dòng)球蛋白(α-SMA)等細(xì)胞因子表達(dá)而抑制HSC的激活，從而抑制肝纖維化的進(jìn)展。 方法:膜透析法提取鱉甲分子量<6000的物質(zhì)，Western-blot法檢測(cè)各組LX-1細(xì)胞colⅠ，Col Ⅲ、α-SMA蛋白表達(dá)。以Actin作為內(nèi)參照。作空白對(duì)照、TGF-β<,1>刺激對(duì)照和干擾素-γ(IFN-γ)對(duì)照。 結(jié)論:鱉甲分子量<6000 物質(zhì)作用組能顯著抑制 TGF-β<,1>刺激的LX-1 細(xì)胞Col-Ⅰ、

7、Col-Ⅲ等蛋白表達(dá)、顯著抑制α-SMA表達(dá)而抑制HSC的激活及肝纖維化發(fā)生發(fā)展。 2．在體實(shí)驗(yàn)：鱉甲防治肝纖維化大鼠作用及機(jī)制研究 目的:探討鱉甲不同劑型防治大鼠肝纖維化及其作用機(jī)制。 方法: 36只雌性SD大鼠隨機(jī)分為6組：正常組、肝纖維化模型組、鱉甲煎煮液防治組和治療組、鱉甲微粉防治組和治療組。除正常組外，其余五組以40％CCl<,4>0.12ml/100g體重背部皮下注射，隔日一次，共12周。造模6周，中

8、等度纖維化形成。藥物防治組于造模同期分別給以鱉甲微粉煎煮液、鱉甲微粉藥液0.27g生藥/100g體重灌胃，1/日；藥物治療組于造模第7周開(kāi)始給以上述藥液灌胃。實(shí)驗(yàn)12周末，采集大鼠血清及肝組織標(biāo)本送檢。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以 x±s表示，應(yīng)用單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料采用 Ridit 檢驗(yàn)法，P<0.05為差異具有顯著性意義。 結(jié)論：鱉甲煎煮液能有效地預(yù)防和治療大鼠肝纖維化，效果顯著，其作用機(jī)制可能是通過(guò)抗脂質(zhì)過(guò)氧化、改善肝組織病理、改善肝功