鱉甲抗肝纖維化活性物質(zhì)及其指紋圖譜研究.pdf

1、鱉甲為傳統(tǒng)中藥，來源于鱉科動(dòng)物鱉(TrionyxsinensisWiegmann)的背甲，具有滋陰潛陽，軟堅(jiān)散結(jié)，退熱除蒸的功效；主治陰虛發(fā)熱，癥瘕，虛風(fēng)內(nèi)動(dòng)等病癥。臨床經(jīng)驗(yàn)表明，以鱉甲為君藥的多種中藥復(fù)方用于治療肝纖維化疾患具有較好的療效；現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，鱉甲提取物對(duì)肝纖維化大鼠模型顯示了較強(qiáng)的抗肝纖維化作用。本論文在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，通過多學(xué)科交叉的研究方法，采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，對(duì)鱉甲抗肝纖維化的活性物質(zhì)及其指紋圖譜進(jìn)行了較系統(tǒng)研

2、究。 采用超聲提取，膜透析分離等方法將鱉甲提取物分為不同分子量范圍的部位，通過其對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖的影響及其對(duì)肝星狀細(xì)胞活化、膠原合成的影響等活性篩選方法，篩選得到分子量小于6000的鱉甲提取物為抗肝纖維化活性部位。 采用日立L8800全自動(dòng)氨基酸分析儀，對(duì)鱉甲抗肝纖維化活性部位的游離和水解氨基酸進(jìn)行了分析測(cè)定研究。結(jié)果表明，活性部位中游離氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.32％，水解氨基酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為58.0％，說明活性部位主要成分為肽

3、類物質(zhì)。 在活性篩選的跟蹤指導(dǎo)下，通過SephadexG-25將鱉甲活性部位分離為9段肽類物質(zhì)，藥理篩選得到4個(gè)分離段具有抗肝纖維化活性；選擇活性最強(qiáng)的分離段進(jìn)行高效液相色譜法分離制備，將其分為7個(gè)部分，活性篩選得到活性較好的組分Bi707—A，其純度達(dá)到90％以上。采用4700串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，測(cè)得其結(jié)構(gòu)片段為Peptide 572，sequence：HGRFG(His—Gly—Arg—Phe—Gly)；Pe

4、ptide542，sequence：NPNPT(Asn—Pro—Asn—Pro—Thr)；Peptide526，sequence：NDDY(Asn—Asp—Asp—Tvr)；經(jīng)NCBI檢索，以上三個(gè)肽類化合物為首次從天然界中分離得到。 首次采用高效毛細(xì)管電泳(HPCE)法建立了鱉甲抗肝纖維化活性部位的指紋圖譜，標(biāo)定了16個(gè)共有峰，色譜峰分離度好，相似度高，方法可靠性強(qiáng)。并對(duì)湖北、浙江、江蘇等10個(gè)產(chǎn)地鱉甲抗肝纖維化活性部位指紋圖