腫瘤相關抗原OVA66的連續(xù)性B細胞表位定位.pdf

1、OVA66是本實驗室應用重組cDNA表達文庫血清學分析（SEREX）技術篩選人卵巢癌cDNA文庫得到的一種新的腫瘤相關抗原。前期實驗結果表明OVA66在正常組織中主要表達于睪丸，而在大部分腫瘤組織中（胃癌、肝癌、卵巢癌等）高表達，呈CT抗原的表達特點，且OVA66的高表達可促進腫瘤細胞的增殖，有利于腫瘤細胞的侵襲和轉移。OVA66是一個廣泛的具有免疫原性的腫瘤相關抗原，不僅能誘導特異性T細胞克隆的產生，還能激發(fā)人體產生體液免疫應答，提示

2、其在臨床腫瘤診斷和治療方面具有良好的前景。本文對腫瘤相關抗原OVA66的連續(xù)性B細胞表位定位進行了研究。主要內容包括兩個方面： ㈠OVA66及其三個片段融合蛋白的表達純化及抗原表位初步定位原核表達并純化pET28b-OVA66融合蛋白，同時將OVA66基因分成三個片段，構建重組質粒pET28a-OVA66片段1、pET28a-OVA66片段2和pET28a-OVA66 片段3 并分別原核表達，純化得pET28a-OVA66 三個

3、片段融合蛋白。收集癌癥患者和正常人血清，建立ELISA法，結合Westernblot結果，獲得17例OVA66抗體陽性的癌癥患者血清，Western blot發(fā)現(xiàn)其中一例患者血清所針對的抗原表位位于OVA66片段3，而本實驗室自制的兩株小鼠抗OVA66單克隆抗體5F4和4G9則分別作用于片段1和片段2。 ㈡OVA66蛋白連續(xù)性B細胞抗原表位的預測及篩選應用生物信息學方法，綜合單參數(shù)（親水性、可及性、柔韌性、極性）預測、二級結構預

4、測、BcePred 及EpiShotTM軟件的預測結果，提示OVA66的連續(xù)性B細胞表位可能位于392-411，270-289，519-538，461-480，10-29，43-55，212-227，284-301和487-501氨基酸殘基的區(qū)域內，合成這些候選表位肽段并應用EILSA 法，分別以小鼠抗OVA66單抗及多抗、兔抗OVA66多抗及17例OVA66抗體陽性的癌癥患者血清作為一抗篩選肽段，以大于空白孔OD值2 倍作為陽性，發(fā)現(xiàn)

5、小鼠多抗作用于肽段P2（OVA66片段2內）和P5（OVA66片段1內），兔多抗作用于肽段P8（OVA66片段2內），而1例癌癥患者作用于肽段P9（OVA66片段3內）。 本研究成功構建了重組載體pET28a-OVA66片段1、pET28a-OVA66片段2和pET28a-OVA66片段3，表達并純化了OVA66及其三個片段融合蛋白。獲得了2條（P2、P5）小鼠抗OVA66多抗針對的表位肽段，1條（P8）兔多抗針對的表位肽段及1