新的腫瘤抗原OVA12的生物學(xué)功能和致瘤機(jī)制研究.pdf

1、腫瘤抗原OVA12是本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用SEREX(Serological analysis of recombinantcDNA expression library)方法從人卵巢癌cDNA表達(dá)文庫(kù)篩選得到的一個(gè)新的CT(cancer/testis)抗原。前期研究表明，OVA12抗原在多種腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞株中高表達(dá)，在正常組織（睪丸除外）及正常細(xì)胞株中不表達(dá)或低表達(dá);將OVA12基因轉(zhuǎn)染SMMC-7721細(xì)胞后，細(xì)胞增殖速度加快，裸鼠體內(nèi)成

2、瘤能力增強(qiáng)。結(jié)果顯示OVA12與腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在密切的關(guān)聯(lián)，因此對(duì)OVA12生物學(xué)功能和作用機(jī)制的深入研究有著重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。本課題主要從以下三個(gè)方面進(jìn)行研究:1）從mRNA及蛋白水平檢測(cè)多種正常和腫瘤細(xì)胞及組織中OVA12的表達(dá)水平，明確其表達(dá)譜特征;應(yīng)用病毒感染的方式構(gòu)建OVA12穩(wěn)定高表達(dá)及干擾細(xì)胞株，通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討OVA12在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)功能。結(jié)果顯示OVA12在多種腫瘤組織和細(xì)胞株中高表達(dá)，

3、而在正常組織和細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá)。體內(nèi)外結(jié)果證實(shí)OVA12在腫瘤細(xì)胞株高表達(dá)或者干擾后能夠顯著促進(jìn)或抑制腫瘤細(xì)胞增殖能力及抗凋亡能力，并能通過(guò)上調(diào)Mcl-1和survivin蛋白的表達(dá)增加腫瘤細(xì)胞對(duì)5-FU的耐藥性;2）以O(shè)VA12穩(wěn)定高表達(dá)和干擾細(xì)胞株為研究對(duì)象，檢測(cè)與細(xì)胞增殖、凋亡密切相關(guān)的信號(hào)分子的表達(dá)變化。結(jié)果顯示OVA12表達(dá)降低能夠顯著提高p53蛋白的表達(dá)，而OVA12高表達(dá)能夠抑制p53蛋白的表達(dá)，但不影響p53 mRN

4、A水平;與對(duì)照組相比，p53熒光素酶基因報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)顯示OVA12干擾細(xì)胞株p53轉(zhuǎn)錄活性明顯增加，而OVA12高表達(dá)細(xì)胞株其轉(zhuǎn)錄活性顯著降低。OVA12能夠調(diào)控p53蛋白的K48位多聚泛素鏈形式，促進(jìn)p53在蛋白酶體的泛素化降解，并能夠影響腫瘤細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物順鉑（依賴p53信號(hào)通路誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡）的敏感性。結(jié)果提示OVA12蛋白能夠負(fù)向調(diào)控p53蛋白;3）利用特異性的p53 shRNA干擾阻斷p53信號(hào)通路，應(yīng)用CCK-8等相關(guān)體

5、內(nèi)外實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)p53蛋白表達(dá)降低后對(duì)OVA12生物學(xué)功能的影響，同時(shí)檢測(cè)調(diào)控p53信號(hào)通路上游的多個(gè)重要蛋白表達(dá)變化，探討OVA12調(diào)控p53信號(hào)通路的作用機(jī)制。結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，在OVA12干擾細(xì)胞株內(nèi)，特異性阻斷p53信號(hào)通路能有效的逆轉(zhuǎn)OVA12表達(dá)降低所導(dǎo)致的細(xì)胞增殖能力降低、G1/S期阻滯等生物學(xué)行為，體內(nèi)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)與體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，證實(shí)OVA12發(fā)揮其生物學(xué)功能依賴于p53信號(hào)通路;OVA12能夠影響腫瘤抑癌基因p