2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、在所有已被克隆的耳聾基因中,DFNA5(Deafness,AutosomalDominantNonsyndromicSensorineural5)是為數(shù)不多的目前為止其生物學(xué)功能及致聾機(jī)制仍不清楚的基因之一。1995年DFNA5被定位于7號染色體15區(qū)7p15,是第五個被定位的常染色體顯性遺傳性耳聾位點(diǎn)。1998年DFNA5基因被克隆,突變位點(diǎn)也被找到。到目前為止,已有多個DFNA5基因的突變被發(fā)現(xiàn)能夠引起耳聾,盡管這些位點(diǎn)在基因組水平

2、都不一樣,但所有引起耳聾的DFNA5基因突變都在mRNA水平使第8外顯子漏讀從而造成開放閱讀框移框,在繼續(xù)翻譯41個本來并不存在的氨基酸后提前終止。
   現(xiàn)在一般認(rèn)為引起耳聾的DFNA5基因突變是一個功能獲得性(gainoffunction)突變,可能與第8外顯子漏讀引起的錯誤翻譯的41個氨基酸有關(guān),理由如下:1)引起耳聾的DFNA5突變都是顯性突變;2)耳聾相關(guān)的突變型DFNA5轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞能夠引起細(xì)胞死亡的增

3、加,轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞則引起細(xì)胞周期停滯;3)DFNA5基因第5外顯子的一個突變也造成開放閱讀框提前終止,但并不引起耳聾。為了在小鼠中模擬人DFNA5耳聾突變,VanLaerL.及同事利用同源重組敲除小鼠DFNA5第8外顯子,造成開放閱讀框移框從而在繼續(xù)翻譯43個原本不存在的氨基酸后提前終止翻譯(小鼠DFNA5突變錯誤翻譯的43個氨基酸與人DFNA5耳聾突變錯誤翻譯的41個氨基酸沒有同源性)。ABR檢測結(jié)果顯示該小鼠并沒有耳聾表型。這也提示我

4、們?nèi)薉FNA5基因第8外顯子漏讀引起的錯誤翻譯的41個氨基酸可能對耳聾的發(fā)生很重要。
   本論文在細(xì)胞水平對DFNA5蛋白的生物學(xué)功能進(jìn)行研究,并對DFNA5突變的致聾機(jī)制進(jìn)行初步探討。本文第一部分主要對DFNA5生物學(xué)功能進(jìn)行了研究。我們利用分子克隆方法構(gòu)建了細(xì)胞轉(zhuǎn)染、酵母雙雜交、GST-pulldown等表達(dá)載體。DFNA5在COS7細(xì)胞的亞細(xì)胞定位表明,野生型DFNA5定位在細(xì)胞質(zhì)中,但是將引起耳聾的DFNA5突變型轉(zhuǎn)染

5、入細(xì)胞中后,貼壁細(xì)胞變少,且蛋白在細(xì)胞質(zhì)中定位不均勻,聚集成團(tuán)。我們用酵母雙雜交、GSTopulldown、IP方法試圖鑒定DFNA5相互作用蛋白。遺憾的是,由于細(xì)胞毒性及蛋白容易失活等原因,目前為止沒有得到作用蛋白。
   HermannLage等將DFNA5穩(wěn)轉(zhuǎn)入MeWoETO1細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染有DFNA5的細(xì)胞系與對照組相比依托泊苷敏感性降低30-35%。他們利用合成熒光探針DEVD-AFC多肽檢測caspase3活性,

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