肝癌相關基因ALC1和HCAP1生物學功能的初步研究.pdf

1、該論文主要是對兩個腫瘤相關基因ALC1、HCAP1所編碼的蛋白以及與它們有相關作用的蛋白的生物學功能進行初步的研究.ALC1基因在肝癌組織的染色體上有比較明顯的擴增,被認為是一個候選的肝癌癌基因,其編碼的蛋白具有SNF家族的特征性結構.通過酵母雙雜交篩選,我們確定了蛋白ALC1與GR家族成員NR4A1的結合;借助與GFP蛋白融合表達,ALC1被集中定位在細胞核,推測ALC1蛋白通過與NR4A1相互作用調節(jié)染色體局部環(huán)境或調控基因的轉錄.

2、N端有一個蛋白激酶樣結構域的NTKL蛋白可與ALC1蛋白的N端相互作用,另外一個新的蛋白也因與NTKL相互作用被命名為NTKL-BP1.用體外結合實驗和細胞內的免疫共沉淀實驗驗證了上述各蛋白間的相互作用.我們進一步用RACE等方法克隆得到人和鼠的同源基因mNTKL-BP1和hNTKL-BP1的全長cDNA序列.用RT-PCR和Northern blot方法觀察到mNTKL-BP1基因在小鼠的正常組織中均有表達.融合GFP蛋白在細胞中表達

3、和免疫熒光染色方法觀察到NTKL和NTKL-BP1蛋白分布在細胞核的外周;集落形成實驗和成瘤實驗的結果表明mNTKL-BP1和hNTKL-BP1蛋白可以抑制肝癌細胞增殖和在體內成瘤;流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)mNTKL-BP1和hNTKL-BP1蛋白的過量表達使停留在G2-M期的細胞數(shù)增加;以上研究結果表明這些蛋白可能具有調節(jié)細胞增殖的功能.HCAP1基因位于雜合性缺失發(fā)生頻率較高的染色體17p13.3區(qū)段,被認為是一個侯選的肝癌抑癌基因.HC