ALC1與EZH2在肝癌中的表達(dá)及其相關(guān) 性研究.pdf

1、背景與目的：肝細(xì)胞癌(HCC)是世界上發(fā)病率第五位的腫瘤，死亡率位居各類腫瘤第三，其發(fā)病隱匿、術(shù)后復(fù)發(fā)率高、放化療不敏感。統(tǒng)計(jì)資料顯示，全球范圍內(nèi)每年約有100-150萬例HCC新發(fā)病例，其中45％病患發(fā)生在中國。HCC的發(fā)生是一個(gè)多基因參與、多步驟、多階段的過程，其中起關(guān)鍵作用的是癌基因激活和抑癌基因的失活。各種因素導(dǎo)致的癌基因和抑癌基因表達(dá)異常，引起肝細(xì)胞增殖、分化異常，機(jī)體對異常細(xì)胞監(jiān)控和殺滅作用減弱，最終導(dǎo)致了 HCC的發(fā)生。因

2、此，探討HCC發(fā)病機(jī)制、尋找特異性分子靶點(diǎn)以有效阻止HCC的發(fā)生發(fā)展是本研究領(lǐng)域的重點(diǎn)內(nèi)容。
　　ALC1(amplified in liver cancer1)，又名CHD1L(chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein1-like gene)，最早在肝癌組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)，定位于染色體1q21區(qū)，基因mRNA全長2.98Kb，編碼897個(gè)氨基酸的蛋白。ALC1在肝癌組織中高度擴(kuò)增，

3、其mRNA與蛋白高表達(dá)于肝癌組織內(nèi)，在肝癌的惡性進(jìn)展中起重要的作用。最新的研究發(fā)現(xiàn)ALC1在胚胎干細(xì)胞中有表達(dá)，與干細(xì)胞的增殖及分化有關(guān)，因此，進(jìn)一步深入探討ALC1的調(diào)控機(jī)制對于篩選安全有效的肝癌治療靶點(diǎn)有重要意義。
　　EZH2(enhancer ofzeste homolog2)基因是果蠅zeste基因增強(qiáng)子的人類同源物，屬于PcG(polycomb group genes)家族。EZH2定位于人染色體7q35-q36位置上

4、，可對染色體進(jìn)行修飾，從而調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄，在胚胎發(fā)育、干細(xì)胞的維持以及腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮著重要作用。EZH2可催化核小體組蛋白H3亞基第27位賴氨酸的三甲基化（H3K27me3）并引起下游基因（如:p53,p21）的沉默，從而在細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞分化、衰老以及腫瘤發(fā)生等一系列生命活動(dòng)的過程中發(fā)揮關(guān)鍵性的作用。在多種腫瘤中如胃癌、肝癌、淋巴瘤、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌等均可檢測到高表達(dá)的EZH2。ALC1與EZH2同為染色質(zhì)結(jié)構(gòu)相關(guān)

5、基因，文獻(xiàn)資料顯示兩者在肝癌組織中表達(dá)趨勢相似，但其是否存在聯(lián)系目前尚不明確，本研究擬從細(xì)胞及組織水平對其進(jìn)行深入探討。
　　方法：
　　1.臨床收集原發(fā)性肝細(xì)胞性肝癌及其匹配的癌旁組織58例（該校附屬醫(yī)院2008年1月-2010年12月手術(shù)切除并經(jīng)臨床病理學(xué)證實(shí)為HCC），常規(guī)制作蠟塊，用組織芯片儀制備肝癌組織微陣列；免疫組織化學(xué)方法檢測ALC1與EZH2在肝癌及癌旁組織中的表達(dá)，結(jié)合臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　2

6、.應(yīng)用RT-PCR和細(xì)胞免疫熒光雙標(biāo)記方法，從 mRNA水平及蛋白質(zhì)水平研究ALC1與EZH2在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)情況。
　　3.應(yīng)用q-PCR和Western Bloting方法檢測siRNA干擾肝癌HepG2、Huh7細(xì)胞ALC1表達(dá)對EZH2表達(dá)的影響，探討其臨床病理學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.成功制備肝癌及其癌旁組織微陣列。
　　2.肝癌組織芯片免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示肝癌組織中ALC1與EZH2均表達(dá)于

7、肝癌組織的胞核，癌旁組織內(nèi)為陰性表達(dá)，其共表達(dá)率為48.1%，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示ALC1與EZH2的表達(dá)呈正相關(guān)。ALC1陽性表達(dá)與患者腫瘤大小、腫瘤數(shù)量、肝硬化以及腫瘤的臨床分期正相關(guān)，與患者的年齡、性別、血清AFP水平、腫瘤血管侵襲、乙肝病毒感染等臨床病理參數(shù)之間未見統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。EZH2陽性表達(dá)與腫瘤的臨床分期呈正相關(guān)，與患者的年齡、性別、血清AFP水平、腫瘤血管侵襲、乙肝病毒感染、肝硬化等臨床病理參數(shù)之間未見統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。

8、>　　3.肝癌細(xì)胞內(nèi)有ALC1及EZH2的mRNA表達(dá)；免疫熒光雙標(biāo)記顯示陽性表達(dá)產(chǎn)物均定位于肝癌細(xì)胞胞核，HepG2細(xì)胞中ALC1與EZH2陽性表達(dá)率分別為78.0%和89.2%，Huh7細(xì)胞中ALC1與EZH2陽性表達(dá)率分別為53.6%和74.6%，兩者在HepG2細(xì)胞中的共表達(dá)率為71.2%，Huh7細(xì)胞中兩者共表達(dá)率為47.3%。
　　4. siRNA干擾ALC1表達(dá)可明顯降低EZH2mRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)