果蠅Fblp生物學(xué)功能及轉(zhuǎn)錄調(diào)控初探.pdf

1、F-box蛋白是SCF復(fù)合體的重要成員，在細(xì)胞周期調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等生命活動(dòng)中發(fā)揮著重要的作用。一般情況下，F(xiàn)-box蛋白的N端含有F-box結(jié)構(gòu)域，長(zhǎng)度約為50個(gè)氨基酸，能夠與是Skp1結(jié)合，F(xiàn)-box蛋白的C端序列能夠與底物特異性的結(jié)合。F-box蛋白與Skp1，Cullin和Rbx1構(gòu)成SCF復(fù)合體，作為E3連接酶介導(dǎo)特異性底物與泛素的結(jié)合。
　　 在果蠅體內(nèi)，CG4221基因編碼的蛋白含有F-box結(jié)構(gòu)

2、域，它的功能未知，我們暫時(shí)命名它為Fblp(F-box like protein)。在本文中，以黑腹果蠅(Drosophilamelanogaster)為實(shí)驗(yàn)材料，研究Fblp的生物學(xué)功能及轉(zhuǎn)錄調(diào)控。
　　 首先通過(guò)一系列的果蠅雜交實(shí)驗(yàn)，得到Fblp的過(guò)表達(dá)果蠅株，以及CG4221基因部分缺失的果蠅突變株。研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)Fblp，能夠使果蠅的翅膀變小，眼睛變小，推測(cè)Fblp的功能可能與細(xì)胞周期的調(diào)控相關(guān)。突變體果蠅與y w果蠅

3、相比，每對(duì)果蠅的產(chǎn)卵量沒(méi)有顯著差異，但是胚胎的結(jié)蛹率及羽化成蟲(chóng)的能力明顯降低，推測(cè)由于CG4221的缺失表達(dá)導(dǎo)致果蠅胚胎不能正常發(fā)育，造成果蠅死亡及發(fā)育遲緩。突變體果蠅CG4221ex95中Fblp蛋白含量略有降低，且突變體果蠅有表型變化。在NCBI網(wǎng)站BLAST Fblp，發(fā)現(xiàn)CG9003、ppa與Fblp有較高的同源性，它們也是果蠅體內(nèi)的F-box蛋白，且與Fblp在果蠅體內(nèi)的表達(dá)譜，在時(shí)間上具有一致性，因此猜想它們與Fblp在功能

4、上有重疊，建立CG4221&CG9003和CG4221&CG9952的兩個(gè)雙突變體，觀察在缺失CG9003或ppa時(shí)，突變體表型變化。同時(shí)研究CG4221基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，通過(guò)5'RACE測(cè)序得到CG4221基因的5'端非編碼區(qū)，轉(zhuǎn)錄因子Twist能夠通過(guò)結(jié)合E-box調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄，構(gòu)建質(zhì)粒pGL3-2473F、pGL3-2273F，luciferase assay結(jié)果顯示，Twist能夠調(diào)控CG4221轉(zhuǎn)錄，可能結(jié)合位點(diǎn)是在CG4221