果蠅Fblp生物學功能及轉錄調控初探.pdf

1、F-box蛋白是SCF復合體的重要成員，在細胞周期調控、轉錄調節(jié)、細胞凋亡、信號轉導等生命活動中發(fā)揮著重要的作用。一般情況下，F-box蛋白的N端含有F-box結構域，長度約為50個氨基酸，能夠與是Skp1結合，F-box蛋白的C端序列能夠與底物特異性的結合。F-box蛋白與Skp1，Cullin和Rbx1構成SCF復合體，作為E3連接酶介導特異性底物與泛素的結合。
　　 在果蠅體內，CG4221基因編碼的蛋白含有F-box結構

2、域，它的功能未知，我們暫時命名它為Fblp(F-box like protein)。在本文中，以黑腹果蠅(Drosophilamelanogaster)為實驗材料，研究Fblp的生物學功能及轉錄調控。
　　 首先通過一系列的果蠅雜交實驗，得到Fblp的過表達果蠅株，以及CG4221基因部分缺失的果蠅突變株。研究發(fā)現，過表達Fblp，能夠使果蠅的翅膀變小，眼睛變小，推測Fblp的功能可能與細胞周期的調控相關。突變體果蠅與y w果蠅

3、相比，每對果蠅的產卵量沒有顯著差異，但是胚胎的結蛹率及羽化成蟲的能力明顯降低，推測由于CG4221的缺失表達導致果蠅胚胎不能正常發(fā)育，造成果蠅死亡及發(fā)育遲緩。突變體果蠅CG4221ex95中Fblp蛋白含量略有降低，且突變體果蠅有表型變化。在NCBI網站BLAST Fblp，發(fā)現CG9003、ppa與Fblp有較高的同源性，它們也是果蠅體內的F-box蛋白，且與Fblp在果蠅體內的表達譜，在時間上具有一致性，因此猜想它們與Fblp在功能

4、上有重疊，建立CG4221&CG9003和CG4221&CG9952的兩個雙突變體，觀察在缺失CG9003或ppa時，突變體表型變化。同時研究CG4221基因的轉錄調控，通過5'RACE測序得到CG4221基因的5'端非編碼區(qū)，轉錄因子Twist能夠通過結合E-box調控基因轉錄，構建質粒pGL3-2473F、pGL3-2273F，luciferase assay結果顯示，Twist能夠調控CG4221轉錄，可能結合位點是在CG4221