CO2氣腹對(duì)人大腸癌細(xì)胞株CX1生長(zhǎng)、增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景:隨著上個(gè)世紀(jì)90年代初期Jacobs第一次開展腹腔鏡結(jié)直腸切除術(shù)以來,因其具有創(chuàng)傷小、恢復(fù)快、術(shù)后瘢痕小等特點(diǎn),并且伴隨著微創(chuàng)相關(guān)手術(shù)器械如超聲刀、氫氣刀、腔內(nèi)切割吻合器(Endo-GIA)等的出現(xiàn),近10余年來腹腔鏡結(jié)直腸癌手術(shù)已逐漸在全世界范圍內(nèi)得到廣泛開展,是目前腹腔鏡用于消化道腫瘤手術(shù)中較成熟的一種手術(shù)方式。但一系列關(guān)于二氧化碳?xì)飧垢骨荤R術(shù)后惡性腫瘤生長(zhǎng)加快、易復(fù)發(fā)、術(shù)后病人遠(yuǎn)期生存率及如何預(yù)防等相關(guān)問題仍存在爭(zhēng)議,其中尤

2、以二氧化碳?xì)飧箤?duì)惡性腫瘤的影響備受大家的關(guān)注,并成為近十余年來的一個(gè)研究熱點(diǎn)。一些研究者認(rèn)為,惡性腫瘤的生長(zhǎng)增殖和轉(zhuǎn)移與二氧化碳或腹腔鏡治療無關(guān)、而是與腫瘤細(xì)胞自身的特點(diǎn)有關(guān)。但同時(shí)也有研究者提出了不同的看法,他們認(rèn)為二氧化碳?xì)飧箤?duì)惡性腫瘤的生長(zhǎng)增殖有影響。目前關(guān)于二氧化碳?xì)飧勾龠M(jìn)惡性腫瘤生長(zhǎng)、增殖的機(jī)制,國內(nèi)外有關(guān)此類的報(bào)道多數(shù)集中在機(jī)體免疫方面、癌細(xì)胞局部微環(huán)境改變、氣腹壓力大小等外源性調(diào)控途徑的研究,關(guān)于細(xì)胞增殖分裂的內(nèi)源性調(diào)控途

3、徑方面的報(bào)道相對(duì)較少。本課題主要通過如下兩部分的研究、探討二氧化碳?xì)飧箺l件下大腸癌CX1細(xì)胞體外生長(zhǎng)增殖以及其細(xì)胞周期調(diào)控因子(CDK4和Cyclin D1)的表達(dá)情況,從細(xì)胞增殖分裂的內(nèi)源性調(diào)控途徑方面對(duì)二氧化碳?xì)飧勾龠M(jìn)惡性腫瘤生長(zhǎng)增殖的機(jī)制進(jìn)行研究。
　　第一部分CO2氣腹對(duì)人大腸癌細(xì)胞株CX1生長(zhǎng)和增殖的影響。
　　【目的】通過本實(shí)驗(yàn)建立的模擬腹腔鏡操作條件,觀察大腸癌CX1細(xì)胞在二氧化碳作用不同時(shí)間下細(xì)胞本身生長(zhǎng)、增

4、殖能力的影響,研究二氧化碳?xì)飧箤?duì)大腸癌細(xì)胞體外生長(zhǎng)、增殖的作用并探討其相關(guān)機(jī)制。
　　【方法】根據(jù)實(shí)際操作腹腔鏡手術(shù)的環(huán)境,建立體外的二氧化碳?xì)飧鼓Ｐ?。以腹腔鏡結(jié)直腸癌手術(shù)常用的氣壓15mmHg的二氧化碳?xì)怏w,分別作用于培養(yǎng)的大腸癌CX1細(xì)胞2h和4h兩個(gè)時(shí)間段,這類細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組。以沒有做處理的大腸癌CX1細(xì)胞為對(duì)照組。采用兩種實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行分析:(1)四甲基偶氮唑鹽比色方法(MTT法)將經(jīng)過處理的大腸癌CX1細(xì)胞分別繼續(xù)培養(yǎng)1~

5、5天,根據(jù)細(xì)胞的光吸收值測(cè)定其生長(zhǎng)情況,同時(shí)繪制生長(zhǎng)曲線;(2)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)大腸癌CX1細(xì)胞處理方法同上,測(cè)定細(xì)胞周期后根據(jù)公式計(jì)算增殖指數(shù)。
　　【結(jié)果】根據(jù)MTT法和FCM法所得到的數(shù)據(jù):(1)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞培養(yǎng)的第1~5天時(shí)間內(nèi),大腸癌CX1細(xì)胞2小時(shí)組和4小時(shí)組的光吸收值均高于相應(yīng)的對(duì)照組(P<0.05),且在第3~5天中,光吸收值更是明顯高于對(duì)照組(P<0.01),(2)從生長(zhǎng)曲線上看,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的幅度均高于

6、相應(yīng)的對(duì)照組,(3)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞培養(yǎng)的第1~5天時(shí)間內(nèi),其增殖指數(shù)均高于相應(yīng)的對(duì)照組(P<0.05),(4)實(shí)驗(yàn)組處于增殖期的細(xì)胞比例均高于對(duì)照組(P<0.05)。
　　【結(jié)論】大腸癌CX1細(xì)胞經(jīng)過15mmHg壓力的二氧化碳?xì)飧固幚砗?自身的生長(zhǎng)增殖速度加快,且處于增殖期的細(xì)胞數(shù)目增多,以上表明二氧化碳?xì)飧箍梢约涌齑竽c癌CX1細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖。
　　第二部分CO2氣腹對(duì)人大腸癌細(xì)胞株CX1中CDK4和CYCLIN D1的影響

7、r>　　【目的】通過本實(shí)驗(yàn)建立的腹腔鏡操作條件,二氧化碳?xì)飧棺饔糜诖竽c癌CX1細(xì)胞2小時(shí)和4小時(shí)兩個(gè)不同時(shí)間段,研究其對(duì)細(xì)胞周期調(diào)控因子的影響,進(jìn)一步探討二氧化碳?xì)飧箤?duì)大腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響及發(fā)生機(jī)制。
　　【方法】根據(jù)實(shí)際操作腹腔鏡手術(shù)的環(huán)境,建立體外的二氧化碳?xì)飧鼓Ｐ?。以腹腔鏡結(jié)直腸癌手術(shù)常用的氣壓15mmHg的二氧化碳?xì)怏w,分別作用于培養(yǎng)的大腸癌CX1細(xì)胞2h和4h兩個(gè)時(shí)間段,這類細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)組。以沒有做處理的大腸癌CX1

8、細(xì)胞為對(duì)照組。將實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)1~5天,采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞周期調(diào)控因子CDK4和Cyclin D1在大腸癌CX1細(xì)胞中表達(dá)情況。
　　【結(jié)果】(1)大腸癌CX1細(xì)胞中的周期調(diào)控因子CDK4和Cyclin D1陽性表達(dá)明顯;(2)在大腸癌CX1細(xì)胞培養(yǎng)的1~5天內(nèi),實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞CDK4和Cyclin D1的平均陽性光密度值(OD)均高于相應(yīng)的對(duì)照組(P<0.01)。
　　【結(jié)論】在經(jīng)二氧化碳?xì)飧固幚淼拇竽c癌CX1細(xì)胞