葡萄生單軸霉孢子囊致病力恢復(fù)及保存方法研究.pdf

1、葡萄生單軸霉是一種專(zhuān)性寄生菌，只危害葡萄，不能在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)和保存。孢子囊是其重要的接種體，孢子囊的致病力、保存以及活力檢測(cè)方法對(duì)病菌的研究至關(guān)重要。本文通過(guò)篩選對(duì)葡萄生單軸霉孢子囊萌發(fā)無(wú)明顯抑制作用的藥劑，并利用藥劑處理、恒溫干燥和真空冷凍干燥的方法處理致病力弱化的菌株，測(cè)定其對(duì)菌株致病力的影響;嘗試?yán)媒M培的方式繁殖葡萄組培苗來(lái)保存和繁殖病菌;在保存時(shí)采用對(duì)真空冷凍干燥的保存材料進(jìn)行真空封存和直接分裝，分裝后分別在不同溫度條件下

2、保存，不同時(shí)間取出葉片點(diǎn)接測(cè)定發(fā)病率;利用MTT染色法和點(diǎn)接生物測(cè)定法對(duì)不同溫度干燥處理后的孢子囊存活力和致病力進(jìn)行了檢測(cè)，并應(yīng)用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)其孢子囊進(jìn)行了MTT染色條件的優(yōu)化。本研究主要研究結(jié)果如下:
　　氨芐青霉素、多菌靈濃度在50.0μg·mL-1對(duì)孢子囊萌發(fā)無(wú)明顯抑制作用，兩種藥劑混合處理后孢子囊葉片點(diǎn)接發(fā)病率最高，發(fā)病率為65.3％，單用氨芐青霉素50.0μg·mL-1處理發(fā)病率為54.7％，單用多菌靈50.0

3、μg·mL-1為50.7％，均明顯高于對(duì)照發(fā)病率34.7％。
　　對(duì)致病力弱化的菌株進(jìn)行處理后，真空冷凍干燥處理的致病力最高，發(fā)病率為94.7％，20℃恒溫干燥處理36h發(fā)病率接近真空冷凍干燥，為90.7％，30℃恒溫干燥處理發(fā)病率為79.3％，顯著高于對(duì)照發(fā)病率34.7％，10℃、40℃處理后孢子囊葉片點(diǎn)接發(fā)病率均低于對(duì)照。
　　無(wú)菌繁殖材料以巨峰品種為最佳，在沒(méi)有寄主材料的季節(jié)繁殖保存葡萄生單軸霉，可用組培苗的葉片來(lái)進(jìn)行

4、保存，增加孢子囊的保存時(shí)間。
　　自然發(fā)病的材料在處理前葉面點(diǎn)接生物測(cè)定病菌的發(fā)病率為91.3％，真空冷凍干燥后，發(fā)病率平均值為95.3％，說(shuō)明真空冷凍干燥并未引起病菌發(fā)病率的降低，且冷凍干燥后病菌致病力較高，適合作為長(zhǎng)期保存材料。在-65℃低溫保存時(shí)，真空封存保存材料80 d后孢子囊葉片點(diǎn)接發(fā)病率仍達(dá)到68.0％，高于直接分裝的發(fā)病率37.3％。研究結(jié)果表明，真空冷凍干燥后的病菌材料在-65℃低溫保存更有利于長(zhǎng)期保存葡萄生單軸霉

5、。
　　葡萄生單軸霉孢子囊MTT染色的最佳條件為溫度36℃，MTT濃度0.05％，染色48 h，孢子囊染色率可達(dá)83.0％。20℃恒溫干燥處理36h顯著提高了孢子囊存活力，葡萄生單軸霉孢子囊的藍(lán)色染色率為79.3％，葉片點(diǎn)接發(fā)病率為98.9％，顯著高于對(duì)照的藍(lán)色染色率52.0％和發(fā)病率62.7％。MTT染色得到的孢子囊藍(lán)色染色率與點(diǎn)接生物測(cè)定法得出的發(fā)病率存在很好的線性關(guān)系y=1.2761x-1.9391，R2=0.9961，孢子