熊果酸載藥納米微球的制備及其體內(nèi)外抗腫瘤的效果評(píng)價(jià).pdf

1、背景：熊果酸是存在于天然植物中的一種五環(huán)三萜類化合物。研究表明，熊果酸具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種生物學(xué)效應(yīng)，其中抗腫瘤是最為突出的作用，其對(duì)多種促癌、致癌物有明顯抵抗作用，同時(shí)對(duì)多種腫瘤細(xì)胞有明顯的細(xì)胞毒作用、誘導(dǎo)分化及抗血管形成作用，其防癌抗癌作用已在臨床中受到越來(lái)越多的重視。但熊果酸作為脂溶性藥物，不溶于水，生物利用度低，嚴(yán)重影響了熊果酸的臨床應(yīng)用。為了解決上述問(wèn)題，納米載藥體系以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)進(jìn)入了我們的視線。將納米技術(shù)和藥物治

2、療結(jié)合產(chǎn)生的納米給藥系統(tǒng)用于抗腫瘤納米藥物的設(shè)計(jì)是目前研究的熱點(diǎn)。高分子納米給藥體系除了具有增加藥物的溶解度，緩釋、控釋等傳統(tǒng)藥物輸送體系所具有的作用外，由于其自身的特殊性，在藥物輸送中體現(xiàn)出許多特有的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，如載藥納米微球可以延長(zhǎng)其體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，提高藥物的吸收和生物利用度，且增加了對(duì)腫瘤病灶部位的靶向性等，這為腫瘤治療提供了一種新的思路。
　　目的：分別選用聚己內(nèi)脂—聚乙二醇(mPEG-PCL)和聚己內(nèi)脂—聚乙烯吡咯烷酮(P

3、VP-PCL)兩種高分子聚合物作為藥物載體，構(gòu)建兩種高載藥量的熊果酸載藥納米微球，通過(guò)測(cè)量其理化性質(zhì)、考察其穩(wěn)定性、釋放性質(zhì)，并且分別在胃癌和肝癌細(xì)胞上驗(yàn)證其抗腫瘤的優(yōu)越性，為這種新型的控釋納米給藥系統(tǒng)的進(jìn)一步開發(fā)提供科學(xué)根據(jù)。
　　方法：采用開環(huán)聚合法制備mPEG-PCL和PVP-PCL兩種高分子聚合物，采用溶劑分散法制備兩種熊果酸載藥納米微球。通過(guò)掃描電子顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察納米微球的形態(tài)，并用動(dòng)態(tài)光散射儀測(cè)定納米微球的

4、粒徑。測(cè)定并計(jì)算得出納米微球的載藥量和包封率，并且測(cè)定兩種載藥微球的體外釋放曲線。在體外細(xì)胞及體內(nèi)動(dòng)物模型上研究?jī)煞N熊果酸載藥納米微球的抗腫瘤效果并探討其可能的抗腫瘤機(jī)制。
　　結(jié)果：⑴成功制備了負(fù)載熊果酸的mPEG-PCL納米微球，通過(guò)對(duì)其表征檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其為表面光滑的不規(guī)則的圓形，其粒徑為144.0±4.0 nm。載藥量為4.75±0.45％，包封率為87±5.3％。體外釋放曲線顯示了熊果酸載藥納米微球良好的緩釋特性。⑵通過(guò)體外細(xì)

5、胞抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)了熊果酸納米微球?qū)τ谌宋赴㏒GC-7901細(xì)胞的殺傷效果明顯強(qiáng)于熊果酸裸藥，且呈明顯的時(shí)間和濃度依賴性，驗(yàn)證了負(fù)載熊果酸的mPEG-PCL納米微球較裸藥的優(yōu)越性，而空白納米微球?qū)?xì)胞生長(zhǎng)基本沒有任何抑制作用，DAPI染色試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，相同濃度含量的熊果酸納米微球較熊果酸裸藥能夠誘導(dǎo)更多的凋亡小體產(chǎn)生，Western blot研究結(jié)果顯示，熊果酸納米微球較熊果酸裸藥顯著抑制COX-2的蛋白表達(dá)，COX-2與Caspase-3

6、的蛋白表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)，抑制COX-2的表達(dá)可以顯著升高Caspase-3的表達(dá)，誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的凋亡，抑制腫瘤發(fā)生和進(jìn)展。⑶為了優(yōu)化納米藥物載體，我們采用了聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作為PEG的替代品，成功制備了負(fù)載熊果酸的PVP-PCL納米微球，本實(shí)驗(yàn)所制備的熊果酸微球的載藥量達(dá)到了12％以上，包封率高達(dá)近85％，體外釋放曲線同樣顯示了熊果酸載藥納米微球良好的緩釋特性。⑷在體外腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)空白納米微球?qū)?xì)胞生長(zhǎng)基本沒有任何抑

7、制作用，說(shuō)明了PVP-PCL載藥納米微球的安全性。而熊果酸裸藥及熊果酸納米微球?qū)π∈蟾伟〩22細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性。且熊果酸納米微球?qū)τ谀[瘤細(xì)胞的殺傷效果都明顯強(qiáng)于熊果酸裸藥，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)熊果酸納米微球?qū)?xì)胞凋亡的影響，我們同樣可以發(fā)現(xiàn)熊果酸納米微球在誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的作用上明顯優(yōu)于熊果酸裸藥，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示了熊果酸納米微球更為優(yōu)越的抑瘤效果。通過(guò)Western blot和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)相關(guān)的目的蛋白表達(dá)情況，