重金屬鎘生物檢測工程菌株的構(gòu)建及應(yīng)用.pdf

1、目的：以綠色熒光蛋白(GFP)基因為報告基因，和重金屬鎘特異性啟動子PcadA構(gòu)建成基因工程重組體導(dǎo)入宿主菌，用于重金屬鎘的特異性檢測。 方法：采用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)從質(zhì)粒pPcadA上擴增得到重金屬鎘離子特異性啟動子PcadA，以綠色熒光蛋白基因為報告基因，以大腸桿菌-枯草桿菌穿梭載體pNGFP構(gòu)建了綠色熒光蛋白鎘離子誘導(dǎo)表達載體。以枯草芽孢桿菌1A751為宿主菌，采用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法將表達載體導(dǎo)入1A751，成功構(gòu)建鎘離子

2、檢測工程菌株。 分別采用不同種類的金屬離子對工程菌株進行誘導(dǎo)試驗，通過測定熒光強度考察工程菌株對鎘離子的特異性。將工程菌株暴露于不同濃度的二價鎘離子(Cd2+)環(huán)境中，在一定的時間內(nèi)測定熒光強度的大小，考察工程菌株對鎘離子的敏感性，了解工程菌株對Cd2+的敏感濃度范圍及響應(yīng)時間并考察工程菌株用于快速檢測重金屬鎘的可行性。 結(jié)果：從工程菌株中提取的重組質(zhì)粒pPcadA-gfp通過酶切鑒定、PCR鑒定顯示啟動子已成功插入載體

3、DNA中，DNA序列分析與預(yù)期結(jié)果完全一致，說明重組體pPcadA-gfp構(gòu)建成功。 工程菌株對鎘以外的11種重金屬離子(As3+、Co2+、Cu2+、Fe2+、Hg2+、Mn2+、Ni2+、Pb2+、Sb3+、Sn2+、Zn2+)基本沒有響應(yīng)，僅對Cd2+產(chǎn)生明顯的效應(yīng)，說明工程菌株對鎘離子具備較好的特異性。 使用不同濃度的鎘在誘導(dǎo)不同時間后觀察GFP的表達情況，發(fā)現(xiàn)工程菌株對Cd2+的敏感性較好，檢測范圍為1μM-5