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文檔簡(jiǎn)介
1、本試驗(yàn)從新疆病死貓腸內(nèi)容物中分離得到病毒。通過(guò)貓腎傳代細(xì)胞(CRFK)傳代,測(cè)定第3代細(xì)胞培養(yǎng)物病毒細(xì)胞半數(shù)感染量(TCID50)為104.21;電鏡下可觀察到呈聚集狀態(tài)的無(wú)囊膜病毒粒子,具有典型細(xì)小病毒形態(tài),病毒以實(shí)心和空心兩種病毒粒子形態(tài)存在;細(xì)胞培養(yǎng)物與FPLV單克隆抗體能夠特異性結(jié)合,可見(jiàn)特異性熒光;將培養(yǎng)的病毒接種易感動(dòng)物,感染幼貓4d出現(xiàn)臨床癥狀,7d內(nèi)全部發(fā)病死亡,剖檢有明顯FPlV感染特征。在發(fā)病貓空腸中PCR擴(kuò)增出FP
2、lVVP2基因條帶。以上試驗(yàn)結(jié)果表明,分離的病毒為貓泛白細(xì)胞減少癥病毒,命名為FPLV-XJ株。 FPLV-XJ株僅在4℃條件下凝集豬紅細(xì)胞,凝集效價(jià)為512;而對(duì)其他動(dòng)物的紅細(xì)胞不凝集,且FPLV-XJ對(duì)豬紅細(xì)胞的凝集作用可被FPLV單克隆抗體所抑制。FPLV-XJ對(duì)犬腎傳代細(xì)胞(MDCK)、人子宮癌細(xì)胞(Hela)、恒河猴腎細(xì)胞(Vero)、雞胚成纖維細(xì)胞(DF-1)、豬腎傳代細(xì)胞(PK-15)不形成CPE;其中在MDCK細(xì)
3、胞第1~4代培養(yǎng)物中可以檢測(cè)到病毒核酸,在其他細(xì)胞培養(yǎng)物中無(wú)病毒核酸檢出。間接免疫熒光監(jiān)測(cè)病毒在細(xì)胞內(nèi)的增殖情況,結(jié)果表明FPLV-XJ適合同步接毒,接毒后第4d~5d病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制達(dá)到高峰,第6d病毒由細(xì)胞中釋放。對(duì)XJ株VP2和NS1基因進(jìn)行擴(kuò)增、序列測(cè)定與分析。結(jié)果表明:FPLV-XJ株的VP2基因長(zhǎng)1755bp,編碼584個(gè)氨基酸,與GenBank中5株FPLV和4株CPV核苷酸序列同源性達(dá)99%以上,氨基酸序列同源性介于98
4、.5%~99.7%。系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)表明,分離的FPLV-XJ株的VP2基因與GenBank中FPLV同在一個(gè)分支;NS1基因長(zhǎng)2007bp,編碼668個(gè)氨基酸,與GenBank中登錄的6株FPLV和5株CPVNS1基因核苷酸及推導(dǎo)的氨基酸序列比較,同源性分別在98.7%~99.3%和98.5%~99.3%,F(xiàn)PLV-XJ株的核苷酸和氨基酸同源性與CPV毒株更接近,系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)表明。FPLV-XJ株NSl基因與CPV-b親緣關(guān)系密切,但
5、FPLV-XJ株NS1基因在FPLV和CPV群外形成單獨(dú)的分支,說(shuō)明FPLN-XJ株NS1基因有進(jìn)一步產(chǎn)生新變異的可能性。依據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果,推測(cè)FPLV-XJ株處于FPLV向CPV變異的過(guò)渡階段。 本試驗(yàn)分離了新疆地區(qū)FPLV-XJ毒株,并從形態(tài)學(xué)、血清學(xué)、組織病理學(xué)、分子生物學(xué)等方面對(duì)FPLV-XJ株的生物學(xué)特性進(jìn)行系統(tǒng)研究。不僅為FPLV的病原特征、致病機(jī)理及流行病學(xué)調(diào)查提供寶貴的資料,還為FPLV和CPV之間的演化研究提供
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