NHL石蠟包埋組織免疫球蛋白基因重排PCR檢測(cè)條件的優(yōu)化.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文NHL石蠟包埋組織免疫球蛋白基因重排PCR檢測(cè)條件的優(yōu)化姓名：齊宗利申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：趙彤20030616蘭二蘭墮奎蘭一——三i!!翌4用8對(duì)(Ig7對(duì)和TCRvl對(duì))基因重排引物，對(duì)144側(cè)(B淋巴瘤113例、T淋巴瘤24例、淋巴結(jié)反應(yīng)性增生7例)石蠟組織的基因重排進(jìn)行了檢測(cè)。三、結(jié)果1①通過(guò)比較15對(duì)引物，設(shè)計(jì)出4對(duì)新的Ig基因重排引物(P2、P2B、PK和PX)。②Prime

2、rPremier軟件結(jié)果認(rèn)為結(jié)構(gòu)較為合理。2①優(yōu)化篩選出8對(duì)(197對(duì)和TCRl對(duì))引物。②用IgHFR3區(qū)基因重排引物測(cè)定DG75細(xì)胞基因重排，可擴(kuò)增出3條清晰條帶，經(jīng)測(cè)序證實(shí)，第一條帶為目的帶，其它兩條均與免疫球蛋白序列有關(guān)；③已經(jīng)向GeneBank遞交了5個(gè)基因序列，最早遞交的P3SFA(V26OL4114bD)已經(jīng)公布，其它序列正在處理之中。3①?gòu)哪０錙D260／OD2蜘比值和穩(wěn)定程度上看，試劑盒法提取的DNA質(zhì)量要略優(yōu)于酚抽提

3、法和消化法；②從用PCR擴(kuò)增看家globin基因片段的結(jié)果來(lái)看，這幾種方法差別不大。4①在49例B細(xì)胞淋巴瘤石蠟組織中，引物對(duì)Pl(FR3區(qū)引物)、P2A(FR2區(qū)引物)、Ple(FRl區(qū)引物)的檢出率分別為714％、612％和367％，Plc檢出率明顯低于Pl和P2A。②FR3區(qū)的引物對(duì)(Pl、P2、P3)對(duì)113例B細(xì)胞淋巴瘤的陽(yáng)性檢出率分別為717％、823％、761％，三者之間檢出率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中，我們自己設(shè)計(jì)的引物對(duì)P2檢

4、出率最高。③Ig輕鏈的引物(PrPE)在39例B細(xì)胞淋巴瘤的檢出率為718％，④經(jīng)測(cè)定結(jié)果的分析、組合和比較，優(yōu)選出一對(duì)最佳引物對(duì)(PIqP2)，使B細(xì)胞淋巴瘤石蠟組織重排的檢出率由823％提高到929％。四、結(jié)論本研究設(shè)從引物分析入手，設(shè)計(jì)出4對(duì)用于免疫球蛋白基因重排的引物(重鏈為P2和P2B，輕鏈為P1c和臥)。通過(guò)淋巴瘤細(xì)胞和石蠟組織基因重排的檢測(cè)，犖導(dǎo)出如下有意義的結(jié)論：1石蠟組織基因重排檢測(cè)中，IgH不同框架區(qū)的引物檢出率明顯