TAP基因多態(tài)性與變應性鼻炎相關性研究.pdf

1、目的：對變應性鼻炎（AR）患者和正常人的抗原處理相關轉運蛋白（TAP）的TAP1333和TAP1637位點進行基因及等位基因分型，探討該基因位點多態(tài)性與變應性鼻炎遺傳易感性之間的關系。
　　 方法：①特異性IgE的檢測。各抽取AR組和對照組研究對象新鮮血液2ml，離心后吸取上層血清。應用阿羅格AD體外診斷盒對血清進行特異性變應原（9項）的檢測。根據(jù)試紙顯色深淺判定陽性結果的強弱程度，分別以+，++，+++表示。②外周血DNA的提

2、取。各抽取AR組和對照組研究對象新鮮抗凝血液2ml，用淋巴細胞分離液提取白細胞后，應用血液基因組DNA提取試劑盒提取出DNA，-20℃進行保存。應用紫外分光光度計測定DNA樣本的純度和濃度，記錄260nm、280nm波長時的OD值。③引物合成。根據(jù)TAP1333和TAP1637位點分別設計四條引物，包括一對共同引物和兩條特異引物。引物設計參照文獻Powis et al.[4]④ARMS-PCR擴增。根據(jù)TAP1333和TAP1637位點

3、等位基因型不同分別設計三組引物，每個研究對象需加A、B、C三管含不同引物對的反應體系，其每管的擴增產(chǎn)物代表同一研究對象的DNA在不同引物對作用下延伸的產(chǎn)物。⑤瓊脂糖凝膠電泳。將同一樣本在不同引物擴增下得到的PCR反應產(chǎn)物混合后進行水平電泳，完畢取出瓊脂糖凝膠，紫外分析燈下分析結果。⑥統(tǒng)計學處理應用SPSS11.0統(tǒng)計軟件分析，計算TAP基因的等位基因頻率、基因型頻率分布，分析基因多態(tài)性與疾病的相關性，組間比較用x2檢驗，P>0.05有統(tǒng)

4、計學意義。
　　 結果：
　　 1.特異性IgE檢測結果：特異性變應原分布情況檢測結果顯示屋塵螨檢測陽性率位于首位（86.67％），其次為花粉類和動物上皮。
　　 2.DNA濃度及純度檢測結果：65例研究對象外周血DNA稀釋后在紫外分光光度計下測定的OD260/OD280比值在1.5～2.0之間。部分樣本可能存在RNA或蛋白質污染，但不影響PCR擴增結果。
　　 3.ARMS-PCR結果：TAP1333位

5、點檢測出三種基因型，分別為Ile/Ile、Ile/Val、Val/Val。A、B、C三管擴增產(chǎn)物大小分別為533bp，351bp和241bp。TAP1637位點檢測出兩種基因型，分別為Asp/Asp和Asp/Gly，A、B、C三管擴增產(chǎn)物大小分別為429bp，180bp，和307bp，在兩組研究對象中均未檢測出Gly/G1y基因型。
　　 4.統(tǒng)計學結果：TAP1333和TAP1637位點基因型的分布頻率在AR組及對照組中都分別

6、以Ⅱ和DD為主，經(jīng)統(tǒng)計學處理，前者差異有顯著性（P<0.05），后者無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；TAP1333和TAP1637位點等位基因型的分布頻率在AR組及對照組中都分別以I和D為主，經(jīng)統(tǒng)計學處理，前者差異有顯著性（P<0.05）；后者無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　 結論：TAP1333基因型和等位基因型頻率的分布在正常人和AR患者中不同，結果有統(tǒng)計學意義，說明此位點基因多態(tài)性與AR具有一定相關性，屬于AR易感基因群