水稻Ac-Ds組織培養(yǎng)再生植株的獲得及Ds的插入分析.pdf

1、用含Ac/Ds轉(zhuǎn)座元件的水稻種子為實驗材料，通過低溫處理和誘導培養(yǎng)基的篩選，誘導出高質(zhì)量的胚性愈傷組織，研究植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)配比、繼代方式、干燥處理和添加物、不同再分化方法處理等對愈傷組織再分化的影響，篩選出最適的分化培養(yǎng)基配方，經(jīng)分化培養(yǎng)獲得一定量的再生植株(Ro)，并經(jīng)田間栽培收獲再生植株的成熟種子(R1)。從再生植株(Ro)對葉片取樣，提取基因組DNA，采用PCR方法檢測Ro植株的Ac/Ds插入，并嘗試采用TAIL-PCR技術擴增

2、側(cè)翼于Ds插入的DNA序列。以Ds側(cè)翼序列為待查詢序列，進行Ds插入位點的模擬分析. 主要結(jié)果如下： 1.培養(yǎng)基中添加1％甘露醇后愈傷組織的質(zhì)地得到改善且增殖率明顯提高；通過干燥處理、不同瓊脂濃度等不同分化培養(yǎng)條件處理，水稻愈傷組織成苗率都有所提高。分化培養(yǎng)基中分別添加適量iP和Na2SiO3，也可以提高成苗率；采用三步分化法成苗率達到53％，明顯優(yōu)于兩步分化法和直接分化法。 2.在5種基因組DNA的提取方法中，

3、SDS法提取的基因組DNA純度及濃度較高，較之CTAB法、簡易法及脲法效果更好。 3.對獲得的111株再生植株(Ro)進行了Ac/Ds檢測。結(jié)果顯示，有94％(105/111)的再生植株含有Ac/Ds，6％(6/111)的再生植株僅含Ac.只帶有Ac而無Ds的再生植株是由于Ds切離而丟失，其具體機制目前還不清楚，有待進一步研究。因此，利用組織培養(yǎng)的方法獲得更多的突變體來構建突變體庫是可行的。 4.在實驗操作的基礎上，分析