轉(zhuǎn)Ac-Ds轉(zhuǎn)座因子大豆后代的鑒定與分析.pdf

1、突變體是分析基因功能最有效的材料，通過(guò)比較突變體與野生型在特定環(huán)境條件下基因表達(dá)的差異可以獲取基因功能的重要信息。構(gòu)建大豆突變體庫(kù)，集中各種變異性狀可以為大豆基因的功能分析提供材料。轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法可以用于突變體庫(kù)的構(gòu)建及功能基因的克隆，是功能基因組學(xué)研究的重要手段。目前，T-DNA標(biāo)簽與轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽相結(jié)合，已成功地構(gòu)建了擬南芥等植物的突變體庫(kù)，在水稻功能基因組研究中也取得了一定的進(jìn)展。然而，在大豆中這方面的研究仍然較少。 本研究試圖

2、利用分子生物學(xué)手段，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室前期轉(zhuǎn)化獲得的Ac和DsT0代940株再生植株及其T1、T2后代3000余株進(jìn)行檢測(cè)，從而篩選得到純合系。在研究過(guò)程中鑒定出一個(gè)表型突變體，并對(duì)這一表型突變體進(jìn)行了初步分析，為大豆突變?nèi)后w的構(gòu)建、突變基因的克隆和大豆功能基因組學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。具體研究結(jié)果如下： 1、對(duì)前期獲得的Ac340株、Ds600株T0代大豆轉(zhuǎn)化再生植株進(jìn)行了葉片巴龍霉素抗性離體檢測(cè)，初步確定了轉(zhuǎn)基因植株。 2、對(duì)轉(zhuǎn)化

3、獲得的T0代植株及其T1、T2后代進(jìn)行了nptⅡ標(biāo)記基因、目的基因的PCR以及Southerndotblot檢測(cè)和測(cè)序分析，初步得到了Ac純合系7個(gè)，Ds純合系9個(gè)，并利用RT-PCR檢測(cè)到了目的基因的轉(zhuǎn)錄。 3、摸索了利用卡那霉素葉片涂抹法進(jìn)行大豆轉(zhuǎn)基因植株快速篩選的可靠性。確定其最佳篩選濃度為500mg/L，篩選臨界觀察時(shí)間以3天為宜，并在此基礎(chǔ)上，對(duì)轉(zhuǎn)基因植株(含nptⅡ基因)分離后代進(jìn)行了卡那霉素涂抹檢測(cè)和PCR檢測(cè)，驗(yàn)

4、證了2種檢測(cè)方法的符合度。結(jié)果表明：抗和高抗卡那霉素植株的PCR檢測(cè)符合度為90.8％，感和高感卡那霉素植株的PCR檢測(cè)符合度為87.1％。 4、獲得了突變株系A(chǔ)c31-1，其T0代與轉(zhuǎn)化受體同樣表現(xiàn)為白花和黃色種皮，但T1代種皮顏色由黃色變?yōu)榫G色，花色依然為白色；在14株T2代植株中，有9株花色由白色變?yōu)樽仙?，T2代種子的種皮顏色也出現(xiàn)分離，綠色、黃色以及介于綠色和黃色之間的顏色都有出現(xiàn)。 5、通過(guò)測(cè)序驗(yàn)證和SSR檢測(cè)