寬葉纈草抗H5N1病毒活性成分研究.pdf

1、高致病性禽流感(HPAI)，如H5N1、H7N9目前已突破種間障礙直接威脅人類的健康。從天然藥物中尋找高效低毒的先導(dǎo)化合物是研制和開發(fā)抗HPAI藥物的一條有效途徑。
　　本研究活性篩選以A/Tiger/Harbin/01/2002(HAB/01)H5N1病毒感染的犬腎細(xì)胞為模型，通過細(xì)胞病變法進行初步活性評價篩選，首次發(fā)現(xiàn)寬葉纈草提取物具有顯著的抗H5N1病毒的活性。
　　本論文對寬葉纈草有效活性部位的化學(xué)成分進行深入研究，

2、并對分離得到的單體進行細(xì)胞水平的抗H5N1活性評價，為抗禽流感藥物的研制與開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
　　本論文運用硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、PHPLC和PTLC等方法進行分離純化，從寬葉纈草根莖提取物中分離得到65個化合物，通過理化常數(shù)的測定，及MS、UV、IR、1DNMR(1H-NMR、13C-NMR)和2D NMR(1H-1HCOSY、HSQC、HMBC、NOESY)等波譜數(shù)據(jù)分析，確定了其中60個化合物的結(jié)構(gòu)

3、，包括21個倍半萜類化合物Volvalerenal F(1)、Volvalerenal G(2)、Volvalerenic Acid F(3)、Volvalerenal H(4)、Volvalerenic Acid G(5)、VolvalerenalI(6)、Volvalerenal J(7)、Volvalerenal K(8)、Madolin A(12)、Volvalerenl A(14)、Volvalerenl C(30)、Volv

4、alerenl B(42)、Madolin B(46)、Volvalerenal D(50)、Volvalerenic A(54)、Aromadendrane-4α,10β-diol(31)、15-hydroxyspathulenol(32)、1-hydroxy-1,11,11-decahydrocyclopropaneazulene-10-one(33)、4α，10α-trimethyl epoxyaromadendrane(49)、

5、Allo-romadendrane-4α，10β-diol(51)和Volvalerenic acid D(52)，3個單萜類化合物Densispicnins C(9)、p-menth-8-ene-1,2-diol(36)和9-hydroxyborneol(45),4個甾體類化合物β-sitosterol(11)、豆甾烷-3，7-二酮(17)、3β-Hydroxy-5α，8α-epidioxyergosta-6，22-diene(41)

6、和豆甾醇(55)，2個三萜類化合物熊果酸(34)和齊墩果酸(56)，6個黃酮類化合物3，5-二羥基-7，4'-二甲氧基黃酮(16)、山奈酚(39)、刺槐素(47)、1，7-二羥基-3，8-二甲氧基咕噸酮(57)、槲皮素(58)和棉花皮素(59)，4個蒽醌類化合物1，3-二羥基蒽醌(19)、1，2-二羥基蒽醌(20)、1，3，8-三羥基-6-羥甲基蒽醌(37)和大黃素(48)，5個木脂素類化合物NeojusticinA(13)、Justi

7、cidin A(18)、Pinoresinol(26)、Pinorespiol(40)和8-hydroxypinoresinol(43)，以及11個芳環(huán)衍生物，其中化合物1-9為新化合物，化合物13、16-20、32、36、37、41、45、47、51、57共13個為首次從纈草屬植物中分離得到，化合物21、22、29、34、38、39、55、56、58-60共11個首次從該植物中分離得到。
　　本研究所發(fā)現(xiàn)的新化合物均為萜類化合物

8、，其中Volvalerenal F-H(1-2、4)、Volvalerenal Acid F(3、5)為雙環(huán)吉瑪烷類倍半萜化合物，Volvalerenal I-K(6-8)為香木蘭烷類倍半萜化合物，Densispicnins C(9)為縮醛骨架的單萜類化合物，這些化合物進一步豐富了寬葉纈草及纈草屬植物的天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)類型。倍半萜的極性較小，多為油狀化合物，使用硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇系統(tǒng)進行洗脫，具有較好的分離效果。
　　對雙環(huán)

9、吉瑪烷類和香木蘭烷類倍半萜化合物的波譜學(xué)特征進行了總結(jié)。這兩種類型倍半萜分子結(jié)構(gòu)中都含有一個三元環(huán)，因此存在著一對特征的環(huán)丙烷質(zhì)子(H-6，H-7)。在香木蘭烷類倍半萜中，這一對質(zhì)子一般出現(xiàn)在δH0-0.6，雙環(huán)吉瑪烷類型倍半萜的環(huán)丙烷質(zhì)子化學(xué)位移一般在δH0.9-1.9，H-6一般為dd或t峰，H-7一般裂分為ddd峰，但由于和其他碳上質(zhì)子化學(xué)位移較近，一般不容易區(qū)分，尤其是H-7質(zhì)子。δH1.6-1.9(H-6)化學(xué)位移一般大于δH

10、0.8-1.0(H-7)雙環(huán)吉瑪烷類一般在C-1和C-5位雙鍵碳上含有烯氫質(zhì)子信號。
　　在13C-NMR中，雙環(huán)吉瑪烷類型化合物一般的會有2個或4個雙鍵碳信號，2個環(huán)丙烷甲基質(zhì)子信號，或者在C-1和C-10位形成一個環(huán)氧三元環(huán)，化學(xué)位移會增加到，C-1和C-10化學(xué)位移會增加到60～70之間。香木蘭烷類型化合物，有兩個環(huán)丙烷甲基質(zhì)子信號，一般不含碳碳雙鍵，如沒有取代，C-1化學(xué)位移在δC55左右，C-5化學(xué)位移在δC48左右。<