人呼吸道甲型流感病毒受體的分布和感染H5N1流感病毒的病理變化.pdf

1、1．背景和目的：
　　 2003年12月至今，H5N1禽流感相繼在歐亞和非洲爆發(fā)，令人震驚的是到目前為止，WHO證實已造成335人感染，有引起世界性大流感的趨勢。目前， H5N1病毒如何跨種屬障礙感染人的分子機制仍未完全清楚。禽流感病毒在人感染率極低，同樣人流感病毒很難在水禽類復制，其主要原因為受體結合特異性限制，流感病毒通過其表面HA與宿主細胞唾液酸受體特異性結合而感染宿主，絕大多數(shù)禽流感病毒與唾液酸α-2,3Gal受體結合，

2、而人流感病毒與唾液酸α-2,6Gal受體結合，相應的禽類和人分別表達唾液酸α-2,3Gal受體和唾液酸α-2,6Gal受體為主。這種受體類型和分布不同被認為流感病毒在禽類和人之間跨種屬傳遞的主要障礙。本研究目的是探討人呼吸道各年齡組各部位流感病毒受體的分布規(guī)律、為H5N1病毒直接感染人提供理論依據(jù)以及禽流感病毒H5N1感染人的病理學特點和組織嗜性。
　　 2．方法：
　　 2.1 親和組織化學法檢測人呼吸道唾液酸α-2,

3、3Gal和α-2,6Gal受體的表達。
　　 2.2人呼吸道組織的流感病毒體外感染。
　　 2.3應用免疫組織化學法，檢測和觀察人感染高致病禽流感病毒尸體解剖全身各組織器官和人呼吸道組織體外感染流感病毒后病毒抗原的分布。
　　 2.4 免疫組化-免疫熒光雙染法：免疫組化法單克隆抗體抗SP-A、CD68分別標記II型肺泡細胞和巨噬細胞，免疫熒光染色法抗流感病毒NP單克隆抗體標記流感病毒蛋白NP。
　　 2.

4、5 采用普通光學顯微鏡觀察法，對1例人感染高致病禽流感病毒H5N1的系統(tǒng)尸體解剖病例組織標本進行病理學觀察。
　　 3．結果：
　　 3.1人呼吸道流感病毒受體的分布，唾液酸α-2,6Gal受體在氣管、支氣管呈高密度分布，隨著支氣管分級逐漸降低分布減少，至肺泡分布最少；而唾液酸α-2,3Gal受體以呼吸部即呼吸細支氣管和肺泡為主，氣管、支氣管和細支氣管少量分布。
　　 3.2胎兒、嬰幼兒、兒童青少年和成年人呼吸道

5、唾液酸α-2,3Gal和α-2,6Gal受體的表達無顯著性差異。
　　 3.3 14例人標本，呼吸細支氣管上皮細胞、肺泡Ⅱ型上皮細胞、肺巨噬細胞均被10株H5N1病毒感染，10株病毒感染無明顯差異，而支氣管至終末細支氣管上皮細胞僅個別細胞感染，氣管上皮細胞無感染。
　　 3.4 人感染高致病禽流感H5N1病毒各組織器官的病理特點：脫屑性氣管支氣管炎，肺臟彌漫性肺泡上皮損傷和/或壞死、肺泡間隔淋巴漿細胞浸潤和纖維化。肺外器

6、官：腎小管局灶壞死，骨髓細胞少量細胞壞死，中樞神經(jīng)系統(tǒng)少量細胞變性、壞死，脾臟白髓萎縮、紅髓充血，肝細胞脂肪變性，胰腺外分泌部部分腺泡上皮壞死。
　　 3.5 H5N1病毒在各組織器官的分布：肺泡的II型肺泡細胞、巨噬細胞，腎小球系膜細胞，胰腺外分泌部腺泡上皮細胞和骨髓細胞、巨噬細胞流感病毒NP均呈陽性表達，顯示出這些細胞為H5N1病毒主要攻擊對象。其它胃腸道粘膜腺上皮、腎小管上皮細胞、中樞神經(jīng)系統(tǒng)細胞、扁桃體巨噬細胞、氣管和支

7、氣管上皮細胞、骨骼肌細胞、心肌細胞和脾臟的巨噬細胞少量陽性表達。
　　 4．結論：
　　 4.1人呼吸道上皮細胞均有流感病毒唾液酸α-2,6Gal和α-2,3Gal受體的分布，以唾液酸α-2,6Gal受體分布為主。氣管、支氣管唾液酸α-2,6Gal受體呈高密度分布，隨著支氣管分級逐漸降低分布減少，至肺泡分布最少，而唾液酸α-2,3Gal受體以呼吸部即呼吸細支氣管和肺泡為主，氣管、支氣管和細支氣管僅少量分布。同時，人呼吸道

8、發(fā)育成熟過程中，唾液酸α-2,3Gal和α-2,6Gal受體的表達無明顯變化。
　　 4.2 呼吸道組織對H5N1病毒敏感，呼吸細支氣管上皮、肺泡Ⅱ型上皮細胞和肺泡巨噬細胞是其攻擊的主要靶細胞，細支氣管、支氣管和氣管少量上皮也可感染，支持唾液酸α-2,3Gal受體分布特點。
　　 4.3 人氣管至肺泡細胞同時表達肺泡唾液酸α-2,6Gal受體和α-2,3Gal受體,同時感染人和禽流感病毒。提示人也是重要流感病毒“基因混合