我國(guó)2005年～2007年H5N1亞型HPAIVs生物學(xué)特性研究.pdf

1、2003年底，東南亞多個(gè)國(guó)家開始暴發(fā)H5N1亞型高致病性禽流感(HPAI)，我國(guó)自2004年1月26日第一起疫情出現(xiàn)以來，相同疫情時(shí)有發(fā)生，我國(guó)青海湖于2005年5月暴發(fā)了流感史上第一起野鳥H5N1亞型HPAI，此后，隨著野鳥的遷徙，該病由亞洲逐漸傳播到歐洲、非洲等地。目前，全世界多個(gè)國(guó)家遭受H5N1亞型高致病力禽流感病毒(HPAIV)的侵害,不僅養(yǎng)禽業(yè)損失慘重，人或其它哺乳動(dòng)物也有感染及死亡病例的發(fā)生，2008年4月28日，WHO報(bào)道

2、全世界已有384人感染，240例死亡。 為全面了解引起我國(guó)2005年～2007年H5N1亞型HPAI疫情的病原的生物學(xué)特性，本文對(duì)主要分離自近3年期間家禽H5N1亞型HPAI疫情及人禽流感相關(guān)的166株H5N1亞型HPAIV進(jìn)行了系統(tǒng)研究。首先，對(duì)全部病毒進(jìn)行了全基因組核苷酸序列測(cè)定、同源性比較及遺傳進(jìn)化分析。 從病毒的進(jìn)化來源來看，這些病毒主要來自于野鳥病毒與GS/GD/1/96的基因重組。研究發(fā)現(xiàn)，這些病毒主要進(jìn)化分

3、為與地理相關(guān)的4個(gè)亞群：ST亞群(南方亞群，SouthernChina,ST)、XJ亞群(Xinjiang，XJ)、SX亞群(Shanxi，SX)和WB亞群(Wildbird,WB)，ST亞群為主要來自湖南、湖北、福建和安徽等南方省份的病毒，XJ亞群為分離自新疆的絕大多數(shù)病毒，WB亞群為分離自遼寧家禽、青海及西藏野鳥的病毒，SX亞群為分離自山西、寧夏2省的病毒。各亞群病毒具有各自的基因特征，SX亞群病毒獲得了抗金剛烷胺的耐藥性。4個(gè)亞群

4、病毒共劃分為11個(gè)基因型，ST亞群分為3個(gè)基因型，XJ亞群分為2個(gè)基因型，SX亞群分為2個(gè)基因型，WB亞群劃分為4個(gè)基因型。ST亞群病毒與東南亞國(guó)家的病毒進(jìn)化關(guān)系密切。3株人流感病毒基因特征與禽流感病毒完全相同，遺傳進(jìn)化地位處于ST亞群，說明其為禽源H5N1亞型HPAIV。 為了解我國(guó)以地域?yàn)樘卣鞫鄟喨憾嗷蛐痛嬖诘?005年～2007年的H5N1亞型HPAIV的抗原性是否發(fā)生了變異，我們選取各亞群的代表病毒制備特異性血清，進(jìn)行

5、全面交叉HA-HI試驗(yàn)，從抗原性變異系數(shù)r值計(jì)算結(jié)果來看，SX亞群病毒與其它亞群病毒存在顯著的抗原性差異，其它3亞群病毒的抗原性差異不顯著。 本研究對(duì)各亞群病毒的代表毒株進(jìn)行了家禽的感染與致病能力評(píng)估，結(jié)果表明4亞群病毒對(duì)SPF雞均為高致病力，但對(duì)鴨的感染和致病力有所不同。ST、XJ和WB3個(gè)亞群的病毒能感染鴨并致病，而SX亞型病毒對(duì)鴨無感染能力。 BALB/C鼠是禽流感病毒感染哺乳動(dòng)物的傳統(tǒng)模型，本研究選取各亞群病毒的

6、代表毒株，應(yīng)用傳統(tǒng)的研究方法，對(duì)我國(guó)2005年～2007年H5N1亞型HPAIV對(duì)哺乳動(dòng)物的感染和致病能力進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果表明4個(gè)亞群病毒未經(jīng)適應(yīng)均具有直接感染哺乳動(dòng)物的能力，但對(duì)鼠的致病力不同，ST亞群病毒對(duì)鼠的致病性呈高、中、低三種，WB亞群病毒對(duì)鼠表現(xiàn)為高致病性；XJ和SX亞群病毒對(duì)鼠呈低致病性。 本研究對(duì)從我國(guó)海關(guān)截獲的越南旅客行李中攜帶的禽蛋表面沖洗物中分離到的3株H5N1亞型HPAIVVN1、VN3和VN8同時(shí)開展了遺

7、傳進(jìn)化與動(dòng)物感染能力研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)3株越南病毒的8個(gè)基因片段均與HK/156/97高度同源，進(jìn)化地位與其處于同一分支，為早期的HK/97-like病毒。該3株病毒對(duì)雞表現(xiàn)為高致病性，對(duì)SPF鴨為低致病力，未經(jīng)適應(yīng)能夠直接感染BALB/C小鼠，但表現(xiàn)為低致病力，僅在鼠的肺臟中復(fù)制。 在對(duì)H5N1亞型HPAIV開展研究的同時(shí)，本文對(duì)我國(guó)目前唯一的一株分離自家禽的H7亞型禽流感病毒CK/HeB/1/02(H7N2)進(jìn)行了全面分析，遺傳

8、進(jìn)化發(fā)現(xiàn)該病毒主要來源于野鳥，由多個(gè)亞型禽流感病毒多基因重組產(chǎn)生。該病毒的IVPI數(shù)據(jù)及HA基因裂解位點(diǎn)顯示為低致病力毒株，SPF雞的靜脈接種和鼻腔感染結(jié)果表明其在雞體內(nèi)的復(fù)制能力較低。BALB/C鼠的感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示其具有直接感染哺乳動(dòng)物能力，盡管為低致病力，但能在哺乳動(dòng)物體內(nèi)多器官有效復(fù)制。 本研究通過對(duì)我國(guó)2005年～2007年的166株H5N1亞型HPAIV的全面系統(tǒng)研究，首次對(duì)引起我國(guó)近年疫情的病毒進(jìn)行了全面的生物學(xué)特

9、性分析。發(fā)現(xiàn)我國(guó)近年的H5N1亞型HPAIV主要以地域?yàn)樘攸c(diǎn)多亞群多基因型存在，各亞群病毒具有獨(dú)立的基因特征。并發(fā)現(xiàn)了對(duì)金剛烷胺具有耐藥性及抗原性明顯變異的亞群。評(píng)估了各亞群病毒對(duì)家禽及哺乳動(dòng)物的感染與致病能力差異；闡明了3株人禽流感病毒為禽源H5N1亞型流感病毒；研究發(fā)現(xiàn)了HK/97-like的3株越南H5N1亞型HPAIV;對(duì)目前唯一的一株H7N2亞型低致病力禽流感病毒，進(jìn)行了全面的生物學(xué)特性研究。 本研究的重要發(fā)現(xiàn)填補(bǔ)了我