雙聯(lián)芐衍生物Riccardin d-26抗癌活性研究.pdf

1、RiccardinD-26是riccardinD的胺甲基化衍生物。RiccardinD是從苔蘚植物Dumortierahirsuta分離得到的大環(huán)雙聯(lián)芐化合物，研究證明riccardinD能在體外、體內(nèi)抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡，riccardinD能顯著降低APCmin+基因小鼠小腸息肉、腺瘤的數(shù)量，提示riccardinD在化學(xué)預(yù)防方面的作用。但riccardinD的水溶性小、生物利用度差，限制了其進(jìn)一步應(yīng)用。為改善其水溶性、增

2、強(qiáng)其生物學(xué)效應(yīng)，我們在riccardinD結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)合成了一系列胺甲基化、鹵化衍生物，并從中篩選得到riccardinD-26。
　　 在肝癌細(xì)胞中，以MTT法和克隆形成法證明riccardinD-26對多種肝癌細(xì)胞有明顯抑制作用，p53野生型肝癌細(xì)胞對riccardinD-26的敏感性高于p53蛋白降低型肝癌細(xì)胞，riccardinD-26對人正常肝細(xì)胞抑制作用較腫瘤細(xì)胞弱。在裸鼠荷瘤模型中，riccardinD-26顯著抑制

3、SMMC-7721的生長，且未觀察到明顯毒性反應(yīng)。細(xì)胞周期分析顯示riccardinD-26能將SMMC-7721細(xì)胞阻滯在G1期。采用Hoechst33258染色、流式細(xì)胞術(shù)及westernblotting證明riccardinD-26可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，表現(xiàn)為細(xì)胞核濃縮、邊緣化，Annexin+/PI+，caspase-9/3及PARP切割帶表達(dá)量上調(diào)。JC-1染色和線粒體/胞漿檢測cytochromec顯示線粒體膜電勢下降，cytoc

4、hromec釋放，Bax/Bcl-2比例上升，提示線粒體介導(dǎo)的凋亡通路被激活。RT-PCR顯示riccardinD-26誘導(dǎo)p53及其下游基因Bax、p21Waf1/Cip1轉(zhuǎn)錄激活;Westernblotting結(jié)果顯示riccardinD-26可誘導(dǎo)p53、Bax轉(zhuǎn)位到線粒體;免疫熒光染色顯示p53入核抑制劑PFT-α能抑制riccardinD-26引起的p53在核內(nèi)積累;流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示p53線粒體轉(zhuǎn)位抑制劑PFT-μ能減輕ri

5、ccardinD-26引起的線粒體膜電勢降低。這些結(jié)果表明riccardinD-26通過p53介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄依賴性和轉(zhuǎn)錄非依賴性途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　 在多藥耐藥細(xì)胞KB/VCR及其親本細(xì)胞KB中，以MTT法和克隆形成法證明riccardinD-26能在體外顯著抑制兩種細(xì)胞的增殖，對KB/VCR和KB的抑制作用無明顯差異。在裸鼠荷瘤模型中，riccardinD-26可顯著抑制KB/VCR和KB移植瘤組織的生長，riccardinD

6、-26對KB/VCR瘤組織的生長抑制率比長春新堿更高，且毒性更低。以DAPI染色，AnnexinV/PI雙染和westernblotting方法證明riccardinD-26可以引起KB/VCR和KB細(xì)胞凋亡。應(yīng)用TUNEL和westernblottin證明riccardinD-26可引起腫瘤組織的細(xì)胞凋亡。JC-1染色和線粒體/胞漿檢測cytochromec顯示線粒體膜電勢下降，cytochromec從線粒體釋放進(jìn)入胞漿，Bax/Bc

7、l-2比例上升，提示線粒介導(dǎo)的凋亡通路的參與。采用westernblotting方法進(jìn)一步分析顯示riccardinD-26以劑量依賴性的方式抑制細(xì)胞存活信號ERK、Akt的磷酸化，同時(shí)提高凋亡信號p38的磷酸化水平，對JNK的磷酸化水平影響則不明顯。上述結(jié)果表明riccardinD-26可能通過影響細(xì)胞存活通路ERK、Akt和凋亡通路p38來誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞KB/VCR的凋亡，從而發(fā)揮抗多藥耐藥的作用。
　　 綜上所述，ricca