下調(diào)Pygo2對U251及U251起源的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的:
　　構(gòu)建Pygo2 RNAi慢病毒載體干擾Pygo2表達(dá)，研究其對人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251增殖與凋亡的影響及機(jī)制，初步探索Pygo2 siRNA對U251起源的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞瘤球大小與數(shù)目的影響。
　　方法：
　　構(gòu)建Pygo2基因shRNA的慢病毒表達(dá)載體，感染人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251，熒光顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染效率。采用RT-PCR檢測Pygo2、CD133、Nestin、Sox2、C-myc基因mRNA表達(dá)，Weste

2、rn blot檢測Pygo2、H3K4me2、H3K4me3蛋白表達(dá)，MTS、流式細(xì)胞儀分別檢測U251增殖和凋亡，懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)及檢測瘤球的大小與數(shù)目。
　　結(jié)果：
　　熒光顯微鏡顯示慢病毒轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞，其效率高達(dá)80％以上，RT-PCR、Western blot結(jié)果提示Pygo2基因及蛋白表達(dá)均下降，H3K4me3蛋白的表達(dá)隨著Pygo2的下調(diào)而降低。同陰性對照組相比，Pygo2 siRNA干擾組細(xì)胞增殖速率減慢，凋

3、亡比率增加。RT-PCR結(jié)果顯示腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物如CD133、Nestin、Sox2，Wnt信號通路下游靶基因C-myc的表達(dá)在干擾組中比陰性對照組低。懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)膠質(zhì)瘤腫瘤干細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其Pygo2的mRNA表達(dá)水平高于貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)的細(xì)胞。在Pygo2 siRNA干擾組中，形成的瘤球大小和數(shù)目較對照組明顯減小、減少。
　　結(jié)論：
　　1、以慢病毒為載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染細(xì)胞，其轉(zhuǎn)染效率與干擾效率均較高。
　　2、Pygo2