LMP-1高及低表達的CNE-2Z細胞系單克隆細胞株的建立及生物學特性.pdf

1、廣東醫(yī)學院碩士學位論文LMP1高及低表達的CNE2Z細胞系單克隆細胞株的建立及生物學特性姓名：李青申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：胡新榮20080501LMP1高表達及低表達的CNE2Z細胞系單克隆細胞株的建立及生物學特性摘要【目的】從CNE2Z細胞系中建立LMP1穩(wěn)定的高及低表達的鼻咽癌單克隆細胞株并研究其生物學特性，為后續(xù)采用RNAi方法阻斷LMP1表達來治療鼻咽癌的研究提供更為合適的細胞模型。【方法】采用有限稀

2、釋法，從人低分化鼻咽癌細胞系CNE2Z中分離出若干個單克隆細胞株，通過免疫細胞化學方法檢測各單克隆細胞株LMP1的表達情況，從中篩選出LMP1高表達及低表達的單克隆細胞株，連續(xù)傳代至30代。用光學顯微鏡觀察兩細胞株的形態(tài)學特征，結晶紫染色法和細胞有絲分裂指數(shù)法檢測兩者的增殖情況，流式細胞儀(FCM)檢測細胞周期、增殖指數(shù)(PI)和凋亡率，平板克隆形成實驗檢測克隆形成率，染色體分析法細胞株的核型特點?！窘Y果】(1)細胞分離后經(jīng)過5個月的培

3、養(yǎng)，成功獲得CNE2Z系的單克隆細胞株共12株，分別編號為L1L12。(2)通過免疫細胞化學染色法初步篩選出LMPl較高表達(8796％細胞陽性)和較低表達(120％細胞陽性)的兩株細胞為L12和L9，并且兩株細胞的第15代、第22代和第30代的LMPl表達無明顯改變。(3)光鏡下兩株細胞均呈人低分化鼻咽癌上皮樣細胞形態(tài)，具有和母系CNE2Z細胞相似的形態(tài)特點，但L12比L9的生長狀態(tài)更好。(4)結晶紫染色法檢測細胞生長曲線結果：L12