水稻Bel基因異源表達特性分析及基因打靶載體構建.pdf

1、水稻Bel基因編碼的細胞色素P450單加氧酶CYP81A6對除草劑苯達松具有抗性作用,對該P450基因進一步深入地研究為將其應用于提高農作物的抗除草劑性能奠定了基礎。同時采用基因打靶技術對水稻.Bel基因進行定點敲除,能有效地獲得苯達松敏感致死株。本研究將水稻Bel基因轉入煙草和番茄基因組中進行表達,對不同抗性的轉基因植株從表型和RNA水平進行分析,同時構建了對Bel基因進行打靶的載體plNA134-Phpt。主要結果如下:
　　

2、 1.將實驗室己有的Bel基因表達載體pKYL71-Bel轉化入煙草和番茄基因組并進行表達。對70株Kan抗性轉基因煙草進行PCR擴增,54株檢測為陽性,轉化效率為77％；對50株Kan抗性轉基因番茄DNA進行PCR擴增,37株檢測為陽性,轉化效率為74％。
　　 2.對轉基因煙草和番茄進行苯達松葉盤篩選和成株檢測,編號為1號和13號的轉基因煙草對濃度為0.25％苯達松具有抗性。編號為3號、23號和29號的轉基因番茄對濃度為0

3、.05％苯達松具有抗性。
　　 3.以β-actin為內參,利用半定量RT-PCR技術對其表達特性進行了研究,結果表明不同苯達松抗性的轉基因植株在mRNA表達水平上也存在相應表達量的變化。
　　 4.對水稻品種C418愈傷誘導及外植體分化的培養(yǎng)基進行優(yōu)化。結果表明當2,4-D為3 mg/L,酵母粉為6 g/L,水解酪蛋白為0.6 g/L時C418的綜合培養(yǎng)能力系數最高。其中,2,4-D對水稻愈傷培養(yǎng)性狀影響顯著(P<0.