大豆磷脂酰膽堿對腦癱幼鼠運動、認知功能障礙的改善作用及機理.pdf

1、目的：研究大豆磷脂酰膽堿(Soybeanphosphatidylcholine，PC)對腦癱(Cerebralpalsy,CP)幼鼠運動、認識功能的影響，應(yīng)用免疫組化的方法觀察突觸素(Synaptophysin,SYN)和乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(Cholineacetyltransferaea，ChAT)在海馬CA1區(qū)的表達變化，探討PC對腦癱鼠運動、認知功能障礙改善作用的機理。 方法：14d的Wistar幼鼠，雌雄不拘，體重25-30

2、g,研究環(huán)境：室溫20+2℃對濕度60％70％，晝夜周期12h(1ight：7：00am-7：00pm)。隨機分為4組：(1)對照組(CC，n=24)：基礎(chǔ)喂養(yǎng)飲食20d，40m1/kg/d自來水灌胃.(2)假手術(shù)組(SO，n=24)：分離左側(cè)頸總動脈和迷走神經(jīng)，但不結(jié)扎，基礎(chǔ)喂養(yǎng)飲食20d，10ml/kg/d自來水灌胃；(3)腦癱組(CM，n=24)：左側(cè)頸總動脈結(jié)扎后通以8％氧氣+92％氮氣的混合氣體，1h后取出，基礎(chǔ)喂養(yǎng)飲食20d

3、，10ml/kg/d自來水灌胃；(4)腦癱PC添加處理組(CM+PC，n=24)：左側(cè)頸總動脈結(jié)扎后通以8％氧氣+92％氮氣的混合氣體，1h后取出，基礎(chǔ)喂養(yǎng)飲食的基礎(chǔ)上，添加4％PC溶液400mg/kg/d連續(xù)灌胃20d；從d2開始，分別應(yīng)用運動協(xié)調(diào)、平衡測試系統(tǒng)(Beamwalkingtestsystem)，運動步態(tài)測試系統(tǒng)(Footprintpattern(Gait)testsystem)測試、分析、評價PC對腦癱幼鼠運動協(xié)調(diào)功能、

4、運動平衡功能、認知功能障礙的治療效果。隔日測一次，共測10天。從d11開始，應(yīng)用Morris水迷宮檢測幼鼠空間學習記憶的變化，連續(xù)檢測3d，隔3d再連續(xù)檢測3d。Morris水迷宮測試系統(tǒng)記錄幼鼠尋找水下平臺的潛伏期(1atency,L)、距離(distance，D)、游泳速度(velocity,V)等相關(guān)參數(shù)。動物分別在d5(n=8)、d10(n=8)、d20(n=8)行灌注固定、取腦、切片，應(yīng)用免疫組化方法檢測各組幼鼠海馬結(jié)構(gòu)突觸素

5、(SYN)和乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(ChAT)免疫反應(yīng)陽性細胞的表達。應(yīng)用MOTAC病理圖象分析儀測量各組幼鼠海馬CA1區(qū)中SYN和ChAT的免疫組化陽性產(chǎn)物光密度值。 結(jié)果：1Morris水迷宮幼鼠空間學習記憶能力的測試結(jié)果(1)CM+PC組、CM組分別與SO組比較，造模后11-13天潛伏期延長，有顯著性差異(P＜0.05)；造模后17-19天，CM+PC組和SO組比較，無差異(P＞0.05)；CM組和SO組比較有顯著性差異(P＜0.

6、01)；CM+PC組與CM組比較有差異(P＜0.05)，CM+PC有改善腦癱鼠認知能力；SO組與CC組比較無差異(P＞0.05)。(2)各組間幼鼠游泳速度比較，沒有明顯差異(P＞0.05)，說明造模并沒有造成幼鼠體力的明顯下降。(3)CM+PC組、CM組分別與SO組比較，尋找水下平臺游泳距離在11-13天延長，有顯著性差異(P＜0.05)；造模后17-19天，CM+PC組和SO組比較，無差異(P＞0.05)；CM組和SO組比較有顯著性差

7、異(P＜0.01)；CM+PC組與CM組比較有顯著差異(P＜0.05)，PC有改善腦癱鼠認知能力的效果SO組與CC組比較無差異(P＞0.05)。 2FootprintPattern測試結(jié)果(1)CM+PC組、CM組與SO組左側(cè)步長比較，造模后1-9天與對照組比較有差異(P＜0.05)；11天后各組之間無差異，可能由于對側(cè)癱瘓引起短時癥狀(P＞0.05)；CC組與SO組比較無差異(P＞0.05)。(2)CM+PC組、CM組與SO組

8、右側(cè)步長比較有顯著差異(P＜0.05)，腦癱導(dǎo)致右側(cè)步長增長；CM+PC組與CM組比較有差異(P＜0.05)，PC可改善腦癱所致右側(cè)步長運動障礙；假手術(shù)組和對照組間右側(cè)步長比較無差異(P＞0.05)。(3)各組間前肢間距比較無差異(P＞0.05)。(4)CM+PC組、CM組與SO組后肢問距比較有差異(P＜0.05)，腦癱導(dǎo)致后肢間距增大；CM+PC組與CM組比較有顯著差異(P＜0.05)，PC有明顯改善腦癱引起后肢間距增大的運動障礙；S

9、O組與CC組比較無差異(P＞0.05)。(5)各組間左側(cè)前、后肢重疊比較無差異(P＞0.05)。(6)CM+PC組、CM組與SO組右側(cè)前、后肢重疊比較有顯著差異(P＜0.05)，腦癱導(dǎo)致右側(cè)前、后肢重疊幾率減低，兩中心點距離增大，與對照組比較有明顯差異；CM+PC組與CM比較有顯著差異·(P＜0.05)，PC有改善腦癱引起右側(cè)前、后肢重疊增大的運動障礙；CC組與SO組比較無差異(P＞0.05)。 3BeamWalking測試結(jié)果

10、(1)從d1到d19天，假手術(shù)組(SO)，對照組(CC)和腦癱組(CM)比較，有明顯差異(P＜0.05，P＜0.01)；說明腦癱模型建立成功，運動協(xié)調(diào)、平衡有明顯差異。腦癱鼠灌胃給PCd1-19，CM+PC組與CM組之間比較有明顯差異(P＜0.05，P＜0.01)；說明大豆磷脂酰膽堿對腦癱模型的運動協(xié)調(diào)、平衡有改善作用，并日趨正常。 4免疫組化測試結(jié)果(1)CM+PC組幼鼠海馬CA1區(qū)SYN和ChAT免疫反應(yīng)陽性產(chǎn)物較CM組表達